ELISA analyse - fra screening for HbsAg til kompleks diagnostikk

Med introduksjon av moderne teknologi i medisin, øker mulighetene for immunokjemiske diagnostiske metoder, som raskt og nøyaktig kan gjenkjenne sykdommen, når andre metoder er maktløse, vokser. Forståelse at hepatitt B-viruset er i stand til å ligge i kroppen i en svært lav konsentrasjon, hvor den ikke kan detekteres selv ved en så pålitelig metode som PCR, gjør det nødvendig å ta en ny titt på problemet med å diagnostisere denne sykdommen og å sette pris på mulighetene for en immunoassay.

I dette materialet vil vi analysere i detalj alt som relaterer seg til denne typen laboratorieforskning. Du vil lære hva et enzymimmunoassay er og hvordan det utføres, hva det australske antigenet er og hvordan det bestemmes, hva de uforståelige forkortelsene Hbs ag, Hbcor, i mellomtiden og deres rolle i å dechifrere analysen, samt få mer nyttig og interessant informasjon.

Innholdet i artikkelen:

Generell informasjon om ELISA

ELISA (forkortet ELISA) er en laboratoriediagnostisk metode som kan oppdage både antigener og antistoffer fra et bredt spekter av infeksjoner, inkludert hepatitt B. Nåværende kunnskap om virusets egenskaper og egenskapene til kroppens immunrespons, gjør det ikke bare mulig å oppdage infeksjonen, men også å identifisere den stadium, effektivitet av vaksinasjon og evaluering av effektiviteten av behandlingen.

Essensen av enzymimmunoassay

ELISA er basert på "antigen-antistoff" -reaksjonen, eller heller dens egenskaper.

Som svar på invasjonen av et fremmed stoff (antigen), som spesielt er proteiner av viruset, produserer kroppen beskyttende proteiner - antistoffer. Antistoffer inngår i en kompleks reaksjon med antigenet, som blokkerer sin aktivitet.

Vi vil snakke mer om antigener og antistoffer under, men nå skal vi merke seg at for hvert antigen er det strengt individ, eller som leger sier, homologe antistoffer. Således, hvis vi vil oppdage et bestemt antigen i blodet, vil vi bruke en diagnostisk tablett med antistoffer mot den. Hvis det er et antigen i blodet, vil det reagere med antistoffer, som kan påvises på ulike måter. Og omvendt. Hvis vi vil finne noen antistoffer, trenger vi en tablett med riktig antigen.

Ofte, diagnostisk verdi av bjørn bare antistoffene som du kan diagnostisere nesten hvilken som helst infeksjon. Imidlertid er det spesielle ved hepatitt B-viruset at hovedrollen i diagnosen spilles av en av antigenene - det australske antigenet.

Hvordan er IFA

Vurder en typisk ELISA-prosedyre for et bestemt eksempel når du vil identifisere antistoffer mot patogenet.

For diagnostikk brukes en tablett med 96 brønner, som er for-mettet med det tilsvarende antigenet. Videre er prosedyren som følger:

serum påføres alle celler;

homologe antistoffer reagerer med antigenet og festes til platen;

Tablett vasket, fjerner ufestede antistoffer;

så blir en enzymatisk etikett introdusert i cellene - et stoff som reagerer med antistoffer og forårsaker flekker av innholdet i cellen.

Dette er standard ELISA-prosedyren med farging, som f.eks. Brukes i immunokromatografiske teststrimler.

ELISA er ikke begrenset til kvalitativ bestemmelse av antistoffer eller antigener av patogenet. Jo flere antistoffer er inneholdt i tablettcellene, desto mer intense farget løsning. Ved å sammenligne sin optiske tetthet med kontrollen, kan moderne utstyr ganske nøyaktig beregne antistoffkoncentrasjonen pr. Volumdel. Således utføres en kvantitativ ELISA, måleenheten til måling hvor oftest er enhetene med optisk tetthet (EOP).

Immunokemiluminescensanalyse

I dag finnes det flere dusin typer ELISA, som hver har et foretrukket omfang. Den mest populære i diagnosen hepatitt B er immunokemiluminescerende analyse.

Den enzymatiske etiketten for denne analysen er ikke kromatiner, som i standard ELISA, men spesielle stoffer - fosfor som forårsaker at komplekset gløder i ultrafiolett lys.

Med hjelp av en spesiell enhet - luminometer kan du nøyaktig bestemme utslippsnivået og som en konsekvens konsentrasjonen av det ønskede stoffet.

Ved hjelp av ELISA-metoder bestemmer nesten alle eksisterende antigener av hepatitt B-viruset og antistoffer mot dem.

Hepatitt B virusantigener: Hbs, Hbe og Hbc

Begrepet antigen (antigen) kommer fra to engelske ord: antistoff - antistoff og generator - produsent. Under antigenet forstår man således ethvert stoff som forårsaker dannelsen av antistoffer i kroppen til det. De vanligste antigenene er proteinforbindelser.

I dag er tre antigener av hepatitt B-virus kjent: hbsag, hbc og hbe.

Australsk antigen

Proteinet som er en del av det ytre skallet til patogen hepatitt B, ble påvist lenge før selve viruset ble funnet. Dette antigenet fikk navnet fordi det først ble identifisert fra de innfødte innbyggerne i Australia. Imidlertid ble proteinet i begynnelsen ikke ansett som et antigen, men et helt normalt element av blod blant de innfødte, og bevisstheten om forbindelsen med leversykdommer kom litt senere.

Langvarig bevaring av antigenet i blodet og fraværet av antistoffer indikerer muligheten for dannelsen av HBeAg-positiv kronisk hepatitt B

I dag i faglitteraturen er navnet "australsk antigen" praktisk talt ikke funnet og har blitt erstattet av den internasjonale forkortelsen - HbsAg (hepatitt b overflateantigen - hepatitt B overflateantigen). I tillegg kan du finne forkortelser hbs antigen eller bare hbs. Enhver av disse forkortelsene er akseptabel og kan suppleres med opptak av HBV eller HBV - hepatitt B-viruset (hepatitt b-virus).

Hepatitt B-virus overflateantigen har en bemerkelsesverdig funksjon som gjør den til en uunnværlig diagnostisk markør. Konsentrasjonen i blodet kan nå svært høye nivåer, opptil en halv milligram per milliliter blod. Dette skyldes at bare en liten del av ny HBsAg, som dannes under reproduksjon av hepatitt B-viruset, går til konstruksjonen av membranene av nye virale partikler, og resten - fritt sirkulerer i blodet. Som et resultat kan antallet hbs partikler i blodet overstige antall virioner hundretusener av ganger.

Denne funksjonen gjør det australske antigenet hovedmerket i screeningsdiagnosen av hepatitt B, som er funnet i blodet så tidlig som 4-6 uker etter infeksjon. Som antistoffer dannes, blir overflateantigenet gradvis erstattet av dem. Hvis HBsAg etter 6 måneder vedvarer, indikerer dette overgangen til infeksjonen i kronisk form.

Nylig, da det ble mulig å bestemme konsentrasjonen av hbs hbv, har dens rolle i diagnosen vokst enda mer, siden det å stole på nivået av antigen kan skille kronisk hepatitt B (HBV) fra en sunn bærestatus, samt overvåke effekten av behandlingen.

Kjerneantigener

I kjernen av viruset - nukleokapsid - er proteiner som styrer reproduksjonen av viruset HBcoreAg og HBeAg.

HBcoreAg, som også kan kalles HBCore-antigen, hbc eller kjerneantigen, kan bare finnes i leverenes vev, direkte i kjernene av hepatocytter. Dette antigenet er ikke påvist i blodet og har ingen diagnostisk verdi.

Strukturen av hepatittviruset

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - tvert imot spiller en viktig rolle i diagnosen. HBeAg og HBcoreAg er nære slektninger. De har en stor likhet med strukturen og avviker hovedsakelig i molekylets romlige posisjon. I motsetning til HBcore er HBe ikke en del av nukleokapsidveggen, og sirkulerer fritt i blodet.

HBe-rollen i den smittsomme prosessen er ikke tilstrekkelig klar, men egenartene i oppførselen og deres forhold til løpet av den smittsomme prosessen er allerede blitt tilstrekkelig studert. HBeAg indikerer aktiv reproduksjon av viruset og lar deg på en pålitelig måte bestemme fasen av kronisk CHB-HBeAg-positiv eller HBeAg-negativ.

HBe kan detekteres i blodet allerede i inkubasjonsperioden for akutt hepatitt B-virus (HBV), mens en høy konsentrasjon av HBeAg i 3 uker sannsynligvis indikerer en trussel om kronisk prosess. Konsentrasjonen av HBe er direkte relatert til innholdet av Dane-partikler (såkalte hepatitt B-viruspartikler) - jo høyere mengden HBe, desto høyere er konsentrasjonen av HBV-DNA i blodet.

HBeAg er en viktig markør for infeksjon av sykdommen. Blodet av HBeAg-positive pasienter er mye mer smittsomt enn HBeAg-negativt. For eksempel når gravid kvinner positive for HBe og Hbs, er sannsynligheten for overføring av infeksjon til barnet 50%, mens sannsynligheten for en slik hendelse i HBe-negative, men Hbs av positive mødre er 10-30%.

Hbe bestemmer løpet av kronisk hepatitt. HBeAg-positiv kronisk hepatitt B har en mye mer ugunstig prognose når det gjelder utvikling av cirrose.

Det er nok alt du trenger å vite om HBV antigener, og vi går videre til den andre gruppen av hepatitt B markører - antistoffer.

Essens og diagnose av hepatitt B

Så snart scenen blir til gulsott, begynner integlene og slimhinnene å bli gule, tilstanden til helse forverres kraftig. Det er viktig å understreke at leveren vokser i størrelse og stikker ut fra under bueskyting. Farvingen av huden i en gul nyanse skjer gradvis. Mengden leverenzymer vokser i blodet, og thymolprøven endres ikke.

Diagnostisering av sykdommen: grunnleggende metoder og konsepter

Diagnose av hepatitt B utføres på flere måter:

1. Først må legen ta anamnese og gjennomføre en grundig undersøkelse av personen. Under undersøkelsen legges stor vekt på slike øyeblikk som:

• om innføring av narkotika eller andre midler til intravenøs;
• om det var blodtransfusjoner;
• om kirurgiske inngrep ble utført
• om skader på hudens integritet var tilstede
• hva er seksuelle forhold
• om pasienten hadde kontakt med pasienten med hepatitt B eller dets bærer.

Hvis noen av disse elementene oppstod, er den angitt i hvor lang tid. Vanligvis oppstår infeksjon ved kontakt fra 6 uker til seks måneder før de første symptomene på hepatitt oppstår.

2. Laboratoriediagnostisering av hepatitt B, ELISA analyse av blod for antigener og antistoffer mot hepatitt B. Denne type undersøkelse er rettet mot å identifisere 3 antigener:

• HBsAg (antigen, plassert overfladisk),
• HBcAg (plassert inne)
• HBeAg (sammenkoblet med forrige antigen). Sykdommen kjennetegnes ved tidlig påvisning av disse antigenene i blodet.

Folk som lider av hepatitt B og inneholder disse antigenene i blodet er svært smittsomme. De kan smitte andre mennesker. Hvis HBsAg er fraværende i humant blod, indikerer dette at han er sunn. Hvis en person er syk, begynner kroppen å utskille antistoffer mot eksisterende antigener.

3. Diagnose av hepatitt B ved hjelp av en PCR-teknikk designet for å oppdage HBV-DNA i sirkulasjonssystemet. Hvis resultatet er positivt, har personen hepatitt. Analysen for HBV DNA kalles kvalitativ. Det er også en kvantitativ PCR. Kvantitativ PCR gir en mulighet til å identifisere belastningen med tilstedeværelsen av hepatittviruset. Hva er viral belastning? Dette er antallet kopier av HBV DNA i 1 ml blod. Kvantitativ analyse av hepatitt viser aktiviteten til viruset.

4. Blodtest for biokjemi. Denne analysen innebærer bestemmelse av antall enzymer produsert av leveren. Slike enzymer inkluderer ALT, AST. De er plassert inne i leveren celler - hepatocytter. Hvis leverceller er skadet, frigjøres enzymene og går inn i blodet. En positiv analyse anses kun når antall leverenzymer overskrider normen. Undersøkelsen indikerer om det er inflammatoriske prosesser i leveren og deres aktivitet.

5. Ultralydundersøkelse, elastometri, etc. Diagnose av hepatitt kan utføres og ikke-laboratoriemetoder. Ved hjelp av ultralyd undersøker bukorganene. Ultralyd gir et klart bilde i enhver inflammatorisk prosess i leveren og dens kar. Effektivt ledende elastometri i leveren. Elastometrimetoden gir en ide om graden av fibrose i leverenvevet.

6. Den viktigste analysen er tilstedeværelsen av hepatitt B-antigener i den røde blodlegemassen. Hvis de eksisterer, indikerer dette forekomsten av infeksjon i menneskekroppen.

7. Laboratorietypen av diagnose av hepatitt inkluderer bestemmelse av antigener og antistoffer i erytrocyttmassen. Den vanligste HBsAg manifesteres i sirkulasjonssystemet selv i inkubasjonsperioden for hepatitt. En person vet ikke om utviklingen av hans sykdom, og i blodet er endringer allerede i gang. Når hepatitt er akutt, forsvinner HBsAg fra blodet. Vanligvis er HBsAg ikke til stede i den første måneden av den icteric perioden, og antistoffer mot dette antigenet begynner å finne ut i sirkulasjonssystemet 90 dager etter infeksjon.

En positiv antistoffprøve betyr ikke at en person har hepatitt. Det er mulig at han tidligere hadde hatt hepatitt uten en D-agent. Hvis det ikke er HBsAg i pasientens blod etter behandlingen, men det er antistoffer, indikerer dette en god prognose som indikerer at pasienten er frisk. Hvis en pasient har kronisk eller alvorlig hepatitt, kan antistoffer fremstå allerede fra de første dagene av isterperioden.

Den pålitelige ekvivalenten er anti-HBc IgM i blodet. De blir avslørt ved slutten av den preikteriske perioden. De er til stede hele perioden med åpenbare manifestasjoner. Hvis analysen inneholder anti-HBc IgM, betyr det at viruset fortsetter å formere seg. Ved oppstart av utvinning forsvinner anti-HBc IgM. Den akutte fasen av sykdommen kan frembringe en anti-HBc IgG-analyse. De vil bli oppdaget gjennom hele livet.

Når inkuberingsperioden for hepatitt (spesielt autoimmun) er fullført, begynner HBeAg å vises i blodet. De informerer om aktiv deling og økning av smittsomme partikler. Så snart den icteric perioden begynner, forsvinner NVAAg. Det er erstattet av anti-HBe. Anti-HBe indikerer at smitteaktiviteten er redusert og gjenopprettingen snart kommer. Men reproduksjonen av viruset stopper ikke!

Akutt hepatitt kan bli kronisk. Om dette vil snakkes identifisert i blodet HВА. Hvis den er til stede, betyr det at sannsynligheten for å omdanne prosessen til en kronisk form er høy. Tilstedeværelsen av HeVag indikerer en svært smittsom pasient.

Det må huskes at laboratoriediagnosen av hepatitt B, som gir et negativt resultat for HBsAg, utelukker ikke selve diagnosen. Et viktig viktig element er tilstedeværelsen av anti-HBc IgM i blodet. Disse antistoffene vil bekrefte sykdommen med nøyaktighet. Hvis blodprøven ikke inneholder anti-HBc IgM, kan dette indikere tilstedeværelsen av HBV, og tilstedeværelsen av disse antistoffene indikerer en intensivering av infeksjonen.

Hepatitt B DNA-deteksjon

Den viktigste studien for å bestemme tilstedeværelsen av virus-DNA er PCR. Analysen indikerer aktiviteten til den smittefarlige prosessen. Med denne metoden kan du lære om prognosen av sykdommen.

Hvis hepatitt er gunstigere, forsvinner HBV DNA fra blodet i begynnelsen av infeksjonsprosessen. Laboratoriediagnostikk i form av PCR gir data om kvaliteten på behandlingen (gjør effekten av et bestemt legemiddel).

For å forstå hva taktikk bør tas for utnevnelse av terapeutiske tiltak, er det nødvendig å utføre en kvantitativ metode for PCR. Kvantitativ PCR gir bevis på en positiv reaksjon fra terapien.

Grunnlag for diagnose

For å gjøre en riktig diagnose, vil følgende undersøkelser være påkrevd:

1. Daglig inspeksjon, palpasjon.
2. Ultralyd i leveren.
3. Biokjemisk analyse av blod (utføres gjentatte ganger).
4. Undersøkelse for HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc totalt, HBV DNA.
5. Markører av HBV og HCV (virus hepatitt er utelukket).
6. Leverpekning.
7. Leverbiopsi. Ved hjelp av en spesiell nål punkteres bukveggen og en liten del av leveren fjernes for histologisk undersøkelse (brikken har en størrelse på ikke mer enn et halvgram). Biopsi er den siste testmetoden for hepatitt. Takket være henne kan du mest nøyaktig snakke om graden av aktivitet av den smittsomme prosessen, leverfibrose. En biopsi er en kirurgisk prosedyre. Det kan føre til komplikasjoner, så det brukes ofte ikke til diagnose.
8. Fibroelastografiya. Det kan brukes til å estimere tetthet av leveren vev. Teknikken ligner ultralyd. Studien bruker en spesiell sensor som er installert på huden på stedet for fremspring av leveren.
9. FibroTest. Det er basert på å telle visse blodtall.

Kronisk hepatitt B

Kronisk hepatitt B fortsetter fase:

Fase 1 - Replikasjon av viruset. Viruset multipliserer med økt aktivitet.

Fase 2 - integrasjon. Viruset slutter å multiplisere. Det virale genomet begynner å integrere i DNA i normale leverceller, hepatocyttene.

For å bestemme utviklingshastigheten for viruset, er det viktig å forstå alvorlighetsgraden av prosessen, utfallet, graden av forstyrrelse av leverenceller. Laboratoriediagnose av kronisk hepatitt er basert på deteksjon av:

Hvis hepatitt HBeAg-positiv (positiv analyse), vil det i erytrocyttmassen være:

• i avlstadiet - HBsAg, HBeAg, anti-HBc IgM, anti-HBc (totalt), HBV DNA;
• i trinnet for innføring av hepatocytter i DNA-HBsAg, anti-HBe, anti-HBc (totalt), HBV DNA.

Hvis hepatitt er seronegativ, vil HBsAg, anti-HBe, anti-HBc IgM, anti-HBc, HBV DNA være tilstede i blodmassen. Dessuten er deres tilstedeværelse på ingen måte avhengig av scenen av den smittsomme prosessen.

Differensial diagnostikk

Ved diagnose er legen pliktig til å skille hepatitt B med andre sykdommer - hepatitt A, C, E, D. Den endelige diagnosen kan kun utføres etter at visse markører som er spesifikke for hver av hepatittcellene, er identifisert i blodmassen.

Hepatitt skal differensieres med andre viktige sykdommer: Akutte respiratoriske virusinfeksjoner, gallestein, matforgiftning, intestinal infeksjon, kirurgisk patologi i bukorganene og mange andre sykdommer.

Autoimmun hepatitt

For autoimmun hepatitt inkluderer diagnosen følgende viktigste undersøkelser:

1. Analyse av røde blodlegemer (OAK). Forklaring: Anemi (normocytisk) i blodet observeres i autoimmun hepatitt, redusert innhold av leukocytter, blodplater og økt ROE. Men en høyere grad av anemi kan forventes.
2. Urin. Dekryptere urinalyse: inneholder protein, røde blodlegemer, bilirubin.
3. Blodtest for biokjemi. Meget relevant analyse. Tolkning: En økt mengde bilirubin, økt arginase, en reduksjon i albumin, en økning i γ-globuliner og en tymol-test. Den sublima testen er redusert. Noen indikatorer kan økes med 2 eller flere ganger. Dette er en positiv test for autoimmun hepatitt.
4. Immunologisk analyse. Dekoding: T-lymfocyt-suppressorer reduseres, lupusceller opptrer i erytrocyttmassen, antall immunglobuliner øker, antistoffer mot erytrocytter.

En positiv test for hepatitt kan påvises ved hjelp av en serologisk undersøkelsesmetode. Autoimmun hepatitt er en heterogen sykdom.

ELISA for viral hepatitt

9. mars, 2017, 16:25 Ekspertartikler: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3,608

For å oppdage virus hepatitt i kroppen bruker medisin i stor grad et enzymimmunoassay basert på deteksjon av konsentrasjon og type antigener ved bruk av antistoffer og enzymer. Det gjennomføres i etapper, ved laboratorieforskning, med høy nøyaktighet av indikasjoner. Avhengig av mengden og klassen av antistoffer, endrer fargen og konsentrasjonen av enzymet som bruker ELISA, og dermed legen diagnostiserer sykdommen.

Hva er ELISA?

Tilstedeværelsen av viral hepatitt i pasientens kropp bestemmes ved bruk av en serologisk metode for blodanalyse for tilstedeværelse av HCV-virus og markører (legemer og antistoffer) som indikerer det. Enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA) undersøker ulike virus, forbindelser med lav molekylvekt, makromolekyler, deres kvalitative og kvantitative indikatorer, ved bruk av manifestasjonen av reaksjonen på deres antigener. For å gjøre dette, bruk enzymet som en etikett for signalregistrering. Det blir stadig mer brukt i medisin, fordi ELISA tydeligvis finner veldefinerte antigener, uten å forvirre dem med andre, har høy følsomhet overfor forekomst av invasjon i viral hepatitt.

Ulempen med en slik diagnose er manglende evne til å identifisere årsaken til sykdommen, siden metoden bare indikerer reaksjonen av kroppens immunsystem. Resultatene av analysen påvirkes av vaksinasjonen som tidligere ble utført. I 8 timer før analysen anbefales det å avstå fra å spise, nikotin, alkohol. Grunnlaget for ELISA-testen er kroppens enzymatiske og immunrespons mot viruset. Biologiske molekyler binder seg til cellen og dets elementer, mikroorganismer, oppdager viruset, og deretter arbeider enzymer som lar deg uttrykke immunresponsen i en synlig og målbar parameter.

Indikasjoner for analyse

Viral hepatitt i kroppen kan forårsake kreft og levercirrhose. Betydningen av rettidig diagnose er ubestridelig. Den primære metoden for diagnose er ELISA-testen, som med høy nøyaktighet bestemmer tilstedeværelsen av HCV-viruset (IgM og IgG) og aktiviteten av sporstoffer. Obligatoriske tester for viral hepatittpass:

1. Personer med risikogrupper (narkomaner, personer med aids, ansatte i medisinske og rettshåndhevende institusjoner).
2. Personer med akutt eller kronisk hepatitt.
3. Gravid og planlegging graviditet kvinner.

ELISA anerkjenner sykdommen på ethvert stadium. Resultatene av analysen er i gjennomsnitt klare i 2 dager.

Kriterier som bestemmer betydningen av analyse

ELISA-testen bestemmer tilstedeværelsen av antistoffer av klassen IgG, IgM, IgA. Ved diagnostisering av viral hepatitt, legger legen ikke hensyn til sin type, siden tilstedeværelsen av en slik manifestasjon av HCV-viruset allerede indikerer et akutt eller kronisk stadium av sykdommen. I de tidlige stadiene av sykdommen stiger nivået av IgM (5 dager etter infeksjon); På den 15. - 20. dag vises IgG antistoffer og kan forbli i menneskelig blod i lang tid, selv etter herding; IgA - vises etter 10-14 dager, reduseres etter behandling.

Hvis IgG og IgA oppdages etter bruk av legemidler og deres nivå forblir i samme hastighet - bæreren har en kronisk form for hepatitt. Et viktig kriterium for testen vil være en klar definisjon av klassen av antistoffer som er tilgjengelige og deres mengde. Basert på dette kan du ikke bare vite om sykdommens nærvær, men også utviklingsstadiet. Påvisning av slike elementer i pasientens blod gjør det mulig å foreskrive riktig og rettidig behandling for å hindre mer alvorlige konsekvenser.

Hvordan er det gjort?

Allokere direkte og ikke direkte ELISA-test. Stadier direkte:

1. Samle biologisk materiale og plassere det i spesielle hull.
2. Innen 15-30 minutter antigener er festet til overflaten av brønnene.
3. Tilsetning av antistoffer til brønnene til antigen funnet. Alle gikk i 1-5 timer.
4. Fjern unattached antigener (helling av brønnens innhold).
5. Skyll brønnene med en spesiell løsning.
6. Legg til enzymløsning til brønnene. La i 30 minutter - 1 time.
7. Bruken av kolorimetri (deteksjon av farge og konsentrasjon av fargen på brønnens innhold, sammenligning med indikatorer som er direkte proporsjonal med virusets konsentrasjon).

Bruk til diagnose av indirekte ELISA vil gi et mer nøyaktig resultat.

Den indirekte ELISA-metoden finner sted ved bruk av umerkede antistoffer mot antigenene som er funnet og den påfølgende tilsetningen merket til dem. Først blir blod tatt fra pasienten og spredt gjennom brønnene i 15-30 minutter. (antistoffer er festet med hull). Deretter blir umerkede antistoffer introdusert i dem i 1-5 timer (forbindelsen av antistoffer med antigener dannes - immunkomplekset). Deretter helles ikke-festede mikroelementer fra brønnene og vaskes med en spesiell løsning. I neste fase legger laboratorietekniker merkede sporstoffer til brønnene i 15-30 minutter. (dette bindes umerket med merket med dannelsen av det komplekse "antistoff-antistoff-antigen"). Ekstra (løs) fjernes igjen under avløp og vask med oppløsning. Neste er enzymet som endrer farge i 5-30 minutter. forblir i hullene, og fargedata sammenlignes med dataene i tabellindikatorene. Indirekte ELISA er mer nøyaktig.

Hva viser en ELISA for viral hepatitt?

Immunoassay gjør det mulig å oppdage infeksjon (hepatittvirus av alle slag, HIV, herpes, syfilis, cytomegalovirus, meslinger, rubella, kussevirus, Epstein-Barr-virus), er en markør for autoimmune sykdommer, kreftceller. Indikerer brudd på reproduktive funksjoner (endringer i testosteron, prolactin, østradiol og progesteron), skjoldbruskfunksjon, helminthesangrep, klamydia. Effektiv for å oppdage ureaplasmose, kikhoste, Dange virus, West Nile virus, Borrelia. Listen over definisjoner er høy, inneholder mange elementer.

Bekreftelse av resultater

Bestemmelse av HCV-virusantigen ved ELISA gir 98% nøyaktighet. Det brukes også til å retestere biologisk materiale med fuzzy tidligere indikatorer. Tilstedeværelsen av IgM antigener er ikke en indikator for akutt hepatitt og krever ytterligere forskning. Når ELISA-testen gjentas, sammenfaller resultatene med 90-100%. I tilfeller med minimal avvik, blir gjennomsnittsverdien tatt som indikator. For maksimal nøyaktighet når det gjelder leger rådgiver parallelt med å utføre en biokjemisk analyse av blod. For å teste resultatene etter enzymimmunoassayet, kan du bruke andre diagnostiske metoder.

Studier av hepatitt B-viruset (ELISA og PCR)

Hepatitt B-virus "s" antigen (HBsAg)

Hepatitt B overflateantigen i serum er normalt fraværende.
Påvisning av hepatitt B overflateantigen (HBsAg) i serum bekrefter akutt eller kronisk infeksjon med hepatitt B-viruset.

Ved akutt sykdom detekteres HBsAg i serum i de siste 1-2 ukene av inkubasjonsperioden og de første 2-3 ukene i klinisk periode. Sirkulasjon av HBsAg i blodet kan være begrenset til noen dager, så du bør strebe etter en tidlig undersøkelse av pasientene. ELISA-metoden tillater å oppdage HBsAg hos mer enn 90% av pasientene. Nesten 5% av pasientene oppdager ikke de mest sensitive undersøkelsesmetodene HBsAg, i slike tilfeller er etiologien for viral hepatitt B bekreftet ved tilstedeværelse av anti-HBcAg JgM eller PCR.

Serum HBsAg-konsentrasjonen i alle former for hepatitt B-alvorlighetsgrad ved sykdommens høyde har et betydelig spekter av svingninger, men det er et bestemt mønster: I den akutte perioden er det et invers forhold mellom serum-HBsAg-konsentrasjonen og sykdommens alvorlighetsgrad.

Høye konsentrasjoner av HBsAg er vanligere i milde og moderate former av sykdommen. I alvorlige og ondartede former er konsentrasjonen av HBsAg i blodet ofte lav, og i 20% av pasientene med alvorlig form og i 30% med et malignt antigen i blodet, kan det ikke oppdages i det hele tatt. Utseendet på denne bakgrunn hos pasienter med antistoffer mot HBsAg betraktes som et ugunstig diagnostisk tegn; Det er bestemt i ondartede former for hepatitt B.

I den akutte løpet av hepatitt B, reduseres konsentrasjonen av HBsAg i blodet gradvis til fullstendig forsvunnelse av dette antigenet. HBsAg forsvinner hos de fleste pasienter innen 3 måneder fra starten av en akutt infeksjon.

En reduksjon i konsentrasjonen av HBsAg med mer enn 50% ved slutten av den tredje uken av den akutte perioden, som regel, indikerer en tett fullføring av infeksjonsprosessen. Vanligvis hos pasienter med høy konsentrasjon av HBsAg ved sykdommens høyde, det oppdages i blodet i flere måneder.
Hos pasienter med lave konsentrasjoner av HBsAg forsvinner mye tidligere (noen ganger flere dager etter sykdomsutbruddet). Generelt går tiden for HBsAg-deteksjon fra flere dager til 4-5 måneder. Maksimal deteksjonsperiode for HBsAg med en jevn løpet av akutt hepatitt B, overstiger ikke 6 måneder fra sykdomsbegyndelsen.

HBsAg kan finnes hos friske mennesker, som regel i profylaktiske eller utilsiktede studier. I slike tilfeller undersøkes andre markører av viral hepatitt B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg, og leverfunksjonen studeres.

Ved negative resultater er det nødvendig med gjentatte studier på HBsAg.
Hvis gjentatte blodprøver i mer enn 3 måneder avslører HBsAg, klassifiseres denne pasienten som en kronisk pasient med viral hepatitt B.
Tilstedeværelsen av HBsAg er ganske vanlig. Det er mer enn 300 millioner luftfartsselskaper i verden, og i vårt land er det rundt 10 millioner transportører.
Oppsigelse av HBsAg-sirkulasjon med etterfølgende serokonversjon (dannelse av anti-HBs) indikerer alltid gjenoppretting - sanering av kroppen.

En blodprøve for tilstedeværelsen av HBsAg brukes til følgende formål:

for diagnostisering av akutt hepatitt B:

• inkubasjonsperiode;
• akutt sykdom;
• tidlig utvinning;
  

for diagnostisering av kronisk viral hepatitt B;

for sykdommer:

• vedvarende kronisk hepatitt;
• levercirrhose;

for screening og identifisering av pasienter i risikogrupper:

pasienter med hyppige hemotransfusjoner;

pasienter med kronisk nyresvikt

pasienter med flere hemodialyser

pasienter med immunsviktstilstander, inkludert AIDS.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatene av studien uttrykkes kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av serum HBsAg. Et positivt resultat - identifiseringen av HBsAg indikerer en inkubasjon eller akutt periode med akutt viral hepatitt B, samt i kronisk viral hepatitt B.

Antistoffer mot nukleært antigen av hepatitt B-virus JgG (anti-HBcAg JgG)

Normalt er serum anti-HBcAg fraværende i serum.
Hos pasienter med anti-HBcAg forekommer JgG i den akutte perioden med viral hepatitt B og vedvarer hele livet. Anti-HBcAg JgG er den ledende markøren for overført HBV.

Blodprøver for anti-HBcAg JgG brukes til å diagnostisere:

kronisk viral hepatitt B i nærvær av HBs-antigen i serumet;

viral hepatitt B.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av serum anti-HBcAg JgG. Et positivt resultat - identifiseringen av anti-HBcAg JgG indikerer en akutt infeksjon, konvalescens eller tidligere overført virus hepatitt B.

Hepatitt B-virus "e" antigen (HBeAg)

Normalt er HBeAg i serum fraværende.
HBeAg kan finnes i serum hos de fleste pasienter med akutt viral hepatitt B. Det forsvinner vanligvis i blodet før HBs-antigenet. Et høyt nivå av HBeAg i de første ukene av sykdommen eller dets deteksjon i mer enn 8 uker gir grunn til å mistenke en kronisk infeksjon.

Dette antigenet oppdages ofte i kronisk aktiv hepatitt av viral etiologi. Av spesiell interesse for definisjonen av HBeAg er det faktum at dets deteksjon karakteriserer den aktive replikative fase av den smittefarlige prosessen. Det er blitt fastslått at høye konsentrasjoner av HBeAg korresponderer med høy DNA-polymeraseaktivitet og karakteriserer aktiv replikasjon av viruset.

Tilstedeværelsen av HBeAg i blodet indikerer sin høye infektivitet, dvs. Tilstedeværelsen av aktiv hepatitt B infeksjon i kroppen blir undersøkt, og detekteres bare i nærvær av HBs antigen i blodet. Hos pasienter med kronisk aktiv hepatitt brukes antivirale legemidler bare når HBeAg detekteres i blodet. HBeAg - antigen - en markør for den akutte fasen og replikasjon av hepatitt B-viruset.

En blodprøve for tilstedeværelse av HBe-antigen brukes til å diagnostisere:

inkubasjonsperiode for viral hepatitt B;

prodromal periode av viral hepatitt B;

akutt periode med viral hepatitt B;

kronisk vedvarende viral hepatitt B.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av serum HBeAg. Et positivt resultat - detektering av HBeAg indikerer en inkubasjon eller akutt periode med akutt viral hepatitt B eller den fortsatte replikasjonen av viruset og infeksjonen hos pasienten.

Antistoffer mot antigenet "e" av hepatitt B-viruset (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg i serum er normalt fraværende. Utseendet til anti-HBeAg-antistoffer indikerer vanligvis intensiv fjerning fra kroppen av hepatitt B-viruset og mindre infeksjon av pasienten.

Disse antistoffene opptrer i den akutte perioden og varer ved opptil 5 år etter infeksjonen. Ved kronisk vedvarende hepatitt er anti-HBeAg funnet i pasientens blod sammen med HBsAg. Serokonversjon, dvs. Overgangen av HBeAg til anti-HBeAg, med kronisk aktiv hepatitt, oftere prognostisk gunstig, men den samme serokonversjonen forbedrer ikke prognosen for alvorlig cirrotisk levertransformasjon.

Blodprøver for tilstedeværelse av anti-HBeAg brukes i følgende tilfeller i diagnosen av viral hepatitt B:

etablere den første fasen av sykdommen;

akutt infeksjon;

tidlig utvinning;

rekonvalesens;

sen stadium gjenoppretting.

diagnose av nylig overført virus hepatitt B;

diagnose av kronisk vedvarende viral hepatitt B.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av antistoffer mot HBeAg i serum. Et positivt resultat er deteksjon av antistoffer mot HBeAg, noe som kan indikere begynnelsestrinnet av akutt viral hepatitt B, den akutte infeksjonsperioden, tidlig stadium av konvalescens, konvalescens, nylig overført virus hepatitt B eller vedvarende viral hepatitt B.

Kriteriene for tilstedeværelse av kronisk hepatitt B er:

detektere eller periodisk detektere HBV DNA i blodet;

kontinuerlig eller periodisk økning i aktiviteten av ALT / AST i blodet;

Morfologiske tegn på kronisk hepatitt ved histologisk undersøkelse av leverbiopsi.

Påvisning av hepatitt B-virus ved PCR (kvalitativt)

Hepatitt B-virus i blodet er normalt fraværende.
Den kvalitative bestemmelsen av hepatitt B-viruset ved PCR-metoden i blodet gjør det mulig å bekrefte tilstedeværelsen av viruset i pasientens kropp og derved fastslå sykdommens etiologi.

Denne studien gir nyttig informasjon for diagnostisering av akutt viral hepatitt B i inkubasjon og tidlig utviklingsstadier av sykdommen, når pasientens viktigste serologiske markører i blodet kan være fraværende. Serum viralt DNA påvises hos 50% av pasientene i fravær av HBeAg. Den analytiske følsomheten til PCR-metoden er ikke mindre enn 80 viruspartikler i 5 μl, den siste DNA-deteksjonsprøven, spesifisitet - 98%.

Denne metoden er viktig for å diagnostisere og overvåke løpet av kronisk HBV. Ca 5-10% tilfeller av cirrhose og andre kroniske leversykdommer er forårsaket av kronisk bærer av hepatitt B-virus. Markører av aktiviteten til slike sykdommer er tilstedeværelsen av HBeAg og DNA av hepatitt B-virus i blodet.

PCR-metoden gjør det mulig å bestemme i blodet DNA av hepatitt B-viruset både kvalitativt og kvantitativt. Det fastlagte fragmentet i begge tilfeller er den unike DNA-sekvensen av genet for det strukturelle protein i hepatitt B-viruset.

Deteksjon av hepatitt B-virus DNA i biomaterialer ved bruk av PCR er nødvendig for:

oppløsning av tvilsomme serologiske testresultater;

påvisning av akutt stadium av sykdommen sammenlignet med tidligere infeksjon eller kontakt;

kontrollere effekten av antiviral behandling.

Forsvinnelsen av hepatitt B-DNA fra blod er et tegn på effekten av behandlingen

Påvisning av hepatitt B-virus ved PCR (kvantitativ)

Denne metoden gir viktig informasjon om intensiteten i utviklingen av sykdommen, effektiviteten av behandlingen og utviklingen av resistens mot aktive stoffer.
For diagnostisering av viral hepatitt ved PCR i serum, brukes testsystemer, hvor følsomheten er 50-100 eksemplarer i en prøve, som gjør det mulig å oppdage viruset i en konsentrasjon på 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopier / ml. PCR i viral hepatitt B er definitivt nødvendig for å bedømme virusreplikasjon.

Serum viralt DNA påvises hos 50% av pasientene i fravær av HBeAg. Blodserum, lymfocytter og hepatobiopsi kan tjene som materiale for å detektere DNA fra hepatitt B-virus.

• Vurdering av nivået av viremia er som følger:
• mindre enn 2,10 ^ 5 kopier / ml (mindre enn 2,10 ^ 5 IE / ml) - lav viremi;
• fra 2,10 ^ 5 kopier / ml (2,10 ^ 5 IE / ml) til 2,10 ^ 6 kopier / ml (8,10 ^ 5 IE / ml) - medium viremi;
• mer enn 2,10 ^ 6 kopier / ml - høy viremi.

Det er et forhold mellom utfallet av akutt viral hepatitt B og konsentrasjonen av HBV DNA i pasientens blod. Med et lavt nivå av viremia er prosessen med kronisering av infeksjonen nær null, med gjennomsnittlig prosessen er kronet hos 25-30% av pasientene, og med høyt nivå av viremia blir akutt viral hepatitt B oftest kronisk.

Indikasjonene for behandling av kronisk HBV interferon-alfa bør betraktes som tilstedeværelse av markører med aktiv viral replikasjon (påvisning av HBV HBV, HBeAg og HBV DNA i blodserumet i løpet av de foregående 6 månedene.).

Kriteriene for å evaluere effektiviteten av behandlingen er forsvinden av HBEAg og HBV DNA i blodet, som vanligvis ledsages av normalisering av transaminase nivåer og langvarig remisjon av sykdommen, HBV DNA forsvinner fra blodet ved den femte behandlingsmåneden hos 80% av pasientene. Å redusere nivået av viremia med 85% eller mer innen tredje dag fra starten av behandlingen sammenlignet med baseline er et raskt og forholdsvis nøyaktig kriterium for å forutsi effektiviteten av behandlingen.

Forskning på viral hepatitt ved metoden for ife

ELISA ved diagnosen viral hepatitt. Enzyme immunoassay evner

Spesifikk laboratoriediagnose av viral hepatitt er basert på bruk av immunokjemiske og molekylære biologiske forskningsmetoder. De viktigste immunokemiske metodene er radioisotop eller radioimmun (RIA) og immunoassay (ELISA). Immunokjemiske diagnostiske metoder er basert på spesifikk interaksjon av et antigen - et antistoff med den påfølgende identifikasjon av komplekset ved hjelp av spesielle etiketter. Det vanligste enzymimmunoassayet.

De første rapportene om bruk av enzymimmunoassay. som en metode for å bestemme stoffer ble utgitt i 1971 samtidig av to forskningsgrupper - V. Van Weemen, A. Schuurs og E. Engvall, P. Perlmann. Enzymimmunoassayet er basert på følgende prinsipp: I fastfasen, som hovedsakelig bruker overflaten av brønnene i en polystyrentablett, fastgjøres antigenet av det infeksiøse middel eller antistoff (ofte en blanding av antistoffer) til antigener som skal detekteres. Dette antigenet eller antistoffene, som er faste på den faste fase, kalles immunosorbent.

Som et resultat av inkuberingen av immunosorbenten og testserumet i nærvær av et detekterbart middel, er de bundet til antigen-antistoffkomplekset. Etter vaskeprosedyren, hvor ubundne antigener og antistoffer fjernes, utføres inkubering med konjugatet. Som et konjugat for påvisning av HBsAg, brukes anti-HBs, ved påvisning av antistoffer mot hepatitt C-viruset - antistoffer mot humane immunglobuliner (antiviruskonjugat) merket med pepperrotperoksidase. Som et resultat av denne inkuberingen skjer vedlegg til de allerede eksisterende antigenkompleksene - antistoffet av det tilveiebende introduserte konjugatet. Etter fjerning av ubundet konjugat (vask) blir substratet innført i brønnene. Ved bruk av et peroksidaskonjugat, brukes hydrogenperoksid som et substrat i kombinasjon med en indikator, som oftest brukes som ortofenylendiamin (OPD) eller tetrametylbenzidin (TMB). Resultatet er estimert fotometrisk.

Kvaliteten og påliteligheten til analytiske evner av enzymimmunoassay-metoden er karakterisert ved et antall kriterier, som inkluderer sensitivitet, spesifisitet, nøyaktighet og reproduserbarhet.

Følsomhet er minimumsbeløpet av et stoff som kan påvises ved enzymimmunoassay. I dette tilfellet er den nedre grensen for sensitiviteten til denne metoden konsentrasjonen av teststoffet i prøven, som tilsvarer det minste positive resultatet av bestemmelsen, som er statistisk signifikant forskjellig fra indikatorene for bevisst negative prøver. Følsomheten til en IFTS er avhengig av en rekke omstendigheter som er relatert både til utformingen av testsystemet (immunosorbentens affinitet, kvaliteten på ekstraksjons- og buffersystemene) og oppløsningen og nøyaktigheten av registreringsmetoden.

Spesifisitet - evnen til å identifisere nøyaktig komponentene for å bestemme hvilke enzymer immunoassay er utformet. Specificiteten av ELISA bestemmes i stor grad av kryssreaksjonen av antistoffer eller antigener (det vil si sammensetningen som anvendes som et immunosorbent) med nært besluttede forbindelser, så vel som sammensetningen av inkubasjonsmediet (matrikseffekt).

Korrektitet - korrespondansen av gjennomsnittsverdien av resultatene av gjentatte bestemmelser av samme kontrollprøve med den sanne verdien av den målte parameteren. Nøyaktigheten av bestemmelsen i ELISA avhenger av kvaliteten på testsystemet og kontrollprøven. For gode immunoassay-testsystemer er korrekthetsindikatorene i området 90-110%. Egenheten ved biomedisinsk forskning i ELISA er umuligheten av å etablere den eksakte verdien, og derfor er gjennomsnittet av flere ekspertlaboratorier tatt som den sanne verdien. Det statistiske kriteriet for korrekthet er det aritmetiske gjennomsnittet og graden av avviket fra den sanne verdien, uttrykt som prosentandel.

Reproducerbarhet - Testsystemets evne til å vise de samme verdiene med gjentatte studier av samme prøve. Reproducerbarheten avhenger både av tilfeldige feil (feil) under reaksjonsprosedyren og på kvaliteten på testsystemene og nøyaktigheten av metoden for registrering av resultatene. Det antas at reproduserbarheten av de samme kontrollprøver av samme selskap i forskjellige laboratorier ikke bør overstige verdien av variasjonskoeffisienten på 15%.

Det finnes flere spesifikke ELISA-ordninger for bestemmelse av virale hepatittmarkører: a) direkte enzymimmunoassay; b) indirekte enzymimmunoassay; c) konkurransedyktig inhibering; c) "felle" eller "fangst" -metode.

Av molekylære biologiske metoder for diagnose av viral hepatitt, polymerasekjede reaksjon og hybridisering er mer vanlig brukt. Disse metodene, spesielt PCR, gjør det mulig å oppdage svært små mengder spesifikt viralt DNA eller RNA og dermed dommereplikasjon, og i noen tilfeller replikasjonsaktivitet.

Hepatitt C blodprøve

Hepatitt C er en av de vanligste leversykdommene som oppstår når de smittes med hepatitt C-viruset (HCV), som kommer inn i kroppen først og fremst når det kommer i kontakt med blodet av en smittet person. Kronisk og akutt hepatitt C oppstår. I 70-80 prosent av pasientene med akutt hepatitt C er det ingen symptomer på sykdommen, men i noen tilfeller, etter noen tid etter infeksjon, er det manifestasjoner av sykdommen som uttrykkes i tretthet, magesmerter, appetittløp, mørkere urin, oppkast, kvalme, lynnedslag, gulsott, smerter i leddene. Symptomene oppstår som regel 6-7 uker etter infeksjon, men varigheten av tegn på sykdommen varierer fra 2 uker til seks måneder. Hvis symptomene ovenfor oppstår, må du konsultere en smittsom lege og ha en blodprøve for hepatitt C. Diagnose av hepatitt, utført i tide, kan oppdage sykdommen i sine tidlige stadier og øke sjansene for utvinning betydelig.

Når en hepatitt C-test er planlagt

Situasjoner når en Hepatitt C-test er nødvendig:

• under graviditet og familieplanlegging;
• pasienter med symptomer på kronisk eller akutt hepatitt;
• personen er i fare. Dette er medisinske arbeidere, personer i fengsel, politimyndigheter, personer som bruker narkotika, har et stort antall seksuelle partnere, har aids, er på hemodialyse og andre.

Forberedelse for hepatitt C-analyse

Spesiell forberedelse til analyse av hepatitt C er ikke nødvendig. For analyse blir blod tatt fra en blodåre i tom mage, samtidig som minst 8 timer skal passere etter det siste måltidet.

Hepatitt C ELISA-analyser

Den første analysen, vanligvis foreskrevet for diagnose av hepatitt C - ELISA test (enzymbundet immunosorbentanalyse). Hepatitt C ELISA-analyser gjør det mulig å oppdage tilstedeværelse av antistoffer mot hepatitt C-viruset (anti-HCVAb) i blodet. Hvis resultatet av ELISA-testen er positivt, indikerer det tilstedeværelsen av kontakt av kroppen med hepatitt C-viruset. Men 40% av de som har en positiv ELISA, oppdager ikke viruset i blodet. Dette fenomenet kalles et falskt positivt resultat. Også ved hjelp av ELISA blir blodgiveren kontrollert.

RIBA for hepatitt C

RIBA-analysen for hepatitt C brukes til å bekrefte et positivt ELISA-resultat. Den rekombinante immunoblottingsmetoden (RIBA) er en mer nøyaktig studie av tilstedeværelsen av antistoffer mot hepatitt C-viruset. Tilstedeværelsen av hepatitt C-virus i kroppen bestemmer heller ikke et positivt resultat, men bekrefter bare tilstedeværelsen av antistoffer.

Hepatitt C PCR tester

For å oppdage tilstedeværelsen av hepatitt C-virus i blodet (HCV RNA) og å foreta en diagnose, bruker de oftest analysen ved hjelp av polymerasekjedereaksjonen (PCR). Denne studien gjør det mulig å oppdage med høy nøyaktighet tilstedeværelsen i blodet av til og med en liten mengde av viruset. PCR-analyse for hepatitt C kan avsløre tilstedeværelsen av et virus allerede 5 dager etter infeksjon, lenge før utseendet av antistoffer. Når resultatet av PCR-analyse er positivt, betyr det at det finnes en aktiv infeksjon.

Det er slike variasjoner av PCR-analysen:

• kvantitativ PCR, som gjør det mulig å bestemme ikke bare faktumet for tilstedeværelsen av viruset, men også den virale belastningen (mengden av viruset). Denne indikatoren er av stor betydning for å bestemme effektiviteten av behandlingen;
• genotyping som etablerer genotypen av hepatitt C-viruset, som er viktig for å bestemme behandlingens varighet og taktikk. Det er mer enn 10 genotyper av hepatitt C-viruset, men for klinisk praksis er det nok å definere fem av de vanligste typene: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

Kvantitativ PCR analyse utføres:

• med en kvalitativ positiv test for tilstedeværelsen av hepatitt C-virus-RNA i serum;
• for en nøyaktig vurdering av effektiviteten av behandlingen;
• å bestemme taktikken til behandling av pasienten.

Det er ikke noe direkte forhold mellom alvorlighetsgraden av hepatitt C og mengden av virus i blodet. Konsentrasjonen av viruset påvirker infeksjonen av sykdommen, det vil si jo større mengden virus i pasientens blod, desto større er risikoen for overføring av viruset, for eksempel gjennom seksuell kontakt eller fra mor til barn. Effektiviteten av behandlingen avhenger også av konsentrasjonen av viruset. Under behandlingen er en gunstig faktor en lav viral belastning, og en svært høy er ugunstig.

Genotypingsanalyse er utført:

• med en kvalitativ positiv test for tilstedeværelsen av hepatitt C-virus-RNA i serum;
• for en nøyaktig vurdering av effektiviteten av behandlingen;
• å bestemme taktikken til behandling av pasienten;
• å forutsi kroningen av den smittsomme prosessen;
• for å bestemme utviklingen av sykdommen.

Detektering av virusets genotype er av stor betydning for å bestemme behandlingsvarigheten, noe som er viktig, da interferon har et bredt spekter av bivirkninger og lav pasient toleranse.

Dekoderingsanalyse for hepatitt C

Normalt er virus RNA, antistoffer mot dem og antigener helt fraværende. Tilstedeværelsen av antistoffer i blodet indikerer tilstedeværelse av kronisk eller akutt hepatitt C eller gjenopprettingstid. Hvis HCV RNA er tilstede i blodet, som bestemmes ved PCR-analyse, indikerer dette tilstedeværelsen av et virus i blodet.

Med en feil testteknikk, transport og blodabnormaliteter kan PCR-analyse noen ganger vise falske positive resultater. Analyser av ELISA og RIBA i de tidlige stadiene av sykdommen, når kroppen ikke har fremstilt en tilstrekkelig mengde antistoffer, kan vise et falsk-negativt resultat.

Hvis det oppnås positive resultater ved detektering av testen for hepatitt C, er det nødvendig å kontakte en smittsom lege og en gastroenterolog for videre diagnostisering og behandling.

Segmenterte nøytrofiler senket

Barnets blodplater er normale, forhøyet, senket

Skjoldbruskstimulerende hormon TGT

Diagnose av hepatitt

Man kan ikke bestemme tilstedeværelsen av hepatitt i kroppen umiddelbart, siden inkubasjonstiden av sykdommen kan vare opptil fire uker. Når de første tegn på sykdommen opptrer, forekommer radikale endringer i blodsammensetningen i den berørte organismen: En biokjemisk analyse rapporterer et alvorlig helseproblem og forekomsten av et patogent virus. Men for å få en endelig diagnose er det ikke nok å donere blod for hepatitt, samt en detaljert diagnose av hepatitt.

Laboratoriediagnose av hepatitt

Det er ønskelig å utføre det etter slutten av inkubasjonsperioden, slik at legen med den største presisjonen kan bestemme leversykdommen som er tilstede i kroppen. Ellers vil den foreskrevne behandlingen ikke gi den ønskede terapeutiske effekten og til og med forverre det rådende kliniske bildet.

Diagnose av hepatitt A

Vanligvis begynner diagnosen av hepatitt A med en detaljert spørsmål om pasienten og utnevnelsen av en rekke tester som må utføres så snart som mulig. Dette er:

• biokjemisk blodprøve;
• fullføre blodtall
• PCR-metode;
• ELISA;
• koagulasjon.

Hvis Botkins sykdom utvikler seg, observeres et unormalt hopp med bilirubin, AlAT og AsAT, tymolprøve i henhold til resultatene av biokjemisk blodanalyse. Videre produseres spesifikt anti-HAV IgM, som er et uopprettelig faktum av tilstedeværelsen av hepatitt A.
Generelt er analysen av blodet bestemt av nedgang i leukocytter, hoppet i ESR og lymfocytose. Og likevel er den mest pålitelige PCR-metoden, som bestemmer indikatoren for RNA for det patogene viruset.
I tillegg studerer legen symptomene på sykdommen, hvoretter det kan gjøre en endelig diagnose og bryte gjennom til den mest effektive terapien. Behovet for instrumental undersøkelse er ekstremt sjelden. Etter vellykket konservativ behandling under forholdene til sykehusinnleggelse og karantene hos pasienten, venter en endelig utvinning, og hepatitt A oppstår ikke igjen.

Diagnose av hepatitt B

For å bestemme tilstedeværelsen av hepatitt B-virus er det også mulig i henhold til resultatene av laboratorietester, og for dette er det første som kreves for å donere blod for hepatitt. Av natur har det patogene viruset tre hovedantigener - HBsAg, HBcAg og HBeAg, til hvilke antistoffer produseres i kroppen. Hovedtrekket i dette kliniske bildet er ELISA - ELISA, som bare avslører spesifikke markører for hepatitt B.
Umiddelbart bør det klargjøres at antigenet HBsAg vises i blodet selv før de første symptomene på hepatitt og er pålitelig bestemt i isterperioden. En negativ test utelukker imidlertid ikke forekomsten av hepatitt B, og krever derfor bruk av en like effektiv polymerasekjedereaksjons (PCR) metode.
Hvis du mistenker at hepatitt B er obligatorisk, er en biokjemisk blodprøve, som anbefales å passere i første omgang. Utførelse av en biopsi av leveren og ultralyd av peritoneale organer diskuteres individuelt, men når sykdommens historie er meget tydelig, er det ikke nødvendig med kliniske undersøkelsesmetoder.

Lever-ekkogram i autoimmun hepatitt ved stadiet av kronisk hepatitt

Diagnose av hepatitt C

For å gjøre denne diagnosen, er det ikke nok å donere blod for hepatitt, siden viruset kan seire i kroppen i latent form. Og likevel er de viktigste laboratorietester alle analysene som presenteres ovenfor, samt tilleggsytelsen til en leverbiopsi. Denne mikroskopiske undersøkelsen av biologisk materiale (i vårt tilfelle et stykke levervev) bestemmer omfanget av den patologiske prosessen og vevsfibrose. Materialprøvetaking utføres under lokalbedøvelse, komplikasjoner av en slik prosedyre er ekstremt sjeldne i medisinsk praksis.
Hvis mistanke om hepatitt C er hovedmetoden for klinisk undersøkelse en ultralyd av peritoneale organer. Årsaken er enkel: sykdommen manifesteres ofte av en visuell forandring i den berørte leveren, endringer i struktur og størrelse. På denne måten kan du bestemme:

• størrelsen på leveren, milten, bukspyttkjertelen og galleblæren;
• patologiske forandringer i disse organene;
• generell blodstrøm i peritoneale organer;
• optimal område for å utføre en leverbiopsi.

Denne metoden for klinisk undersøkelse bestemmer alle fokale patologier av et organ på mikroskopisk nivå. Hvis leveren er representert på skjermen i grå skala, er det nødvendig med øyeblikkelig biopsi, siden den grå fargen visualiserer det berørte vevet av "menneskelig filter".

Forebygging av hepatitt

Siden sykdommen ikke manifesterer seg umiddelbart, er det langt fra alle de kliniske bildene som går videre til umiddelbar behandling. Pasienten kan rett og slett ikke være klar over eksistensen av et patogent virus i kroppen, som i sin tur sprer seg raskt inn i blodet og smitter sunt leverceller.
For å unngå en slik tragisk skjebne anbefales det å overholde alle forebyggende tiltak. Slike årvåkenhet vil redusere risikoen for sykelighet betydelig og spare deg for alvorlige helseproblemer i fremtiden. De grunnleggende regler for forebygging er presentert nedenfor:

• vask hendene dine etter gaten;
• å utsette for høy kvalitet behandling fersk grønnsaker og frukt;
• å utføre alle forebyggende vaksinasjoner angitt i den årlige kalenderen
• selektiv holdning til seksuelle partnere;
• unngå kontakt med syke mennesker;
• Bruk bare engangssprøyter og vær spesielt oppmerksom på blodtransfusjonstasjoner.

Det anbefales også å regelmessig (hver sjette måned) donere blod for hepatitt, for å sikre at viruset ikke trenger inn i kroppen og ikke smitter de en gang sunne leveren celler. Hvis diagnosen er bestemt, er det pålagt å umiddelbart bli dispensary-konto og følge alle anbefalinger fra en spesialist.

Publikasjonsforfatter:
Syropyatov Sergey Nikolaevich
Utdanning: Rostov State Medical University (Rostov State Medical University), Institutt for gastroenterologi og endoskopi.
gastroenterolog
Doktor i medisinske fag