Hepatitt B PCR

Tilgjengeligheten av moderne anti-hepatitt B (HBV) medikamenter med klare indikasjoner på deres administrasjon krever en nøyaktig og rask verifisering av diagnosen. På grunn av knappe kliniske data i de første ukene av sykdommen og begrensede immunanalysemetoder for analyse, reduseres frekvensen av diagnosen.

Tilstedeværelsen av markører anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe gjør at du kan bekrefte HBV eller oppdage en tidligere sykdom. Men det er mulig å bestemme tilstedeværelsen av aktive virale partikler i blodet og telle tallet deres på tidspunktet for studien ved hjelp av PCR - en kvantitativ sanntidsprøve for å oppdage hepatitt B. Metoden sammenligner med ELISA diagnostiseringsmetoder diagnoseproblemer og gjør det mulig å forutsi sykdomsforløpet mens du mottar antivirale legemidler.

Grunnleggende om sykdomsdiagnose

Diagnose av hepatitt B er basert på vurdering av kliniske manifestasjoner, enzymimmunoassay og instrumentelle metoder for forskning. Sykdommen oppstår i den akutte fasen etter inkuberingsperioden, og avhengig av infeksjonsdosen og effektiviteten av behandlingen, går det inn i et kronisk stadium. Hovedmålet med behandlingen er å forhindre kronisering, det vil si eliminering av alle virale partikler fra blodet. Det kliniske løpet av sykdommen er en kur uten etterfølgende viremi.

Faktumet med å eliminere infeksjonen må bevises ved en kvantitativ metode for forskning.

Siden en immunoassay med kvalitativ enzym gjør det mulig å diagnostisere HBV indirekte, det vil si, det viser ikke patogenens tilstedeværelse i kroppens indre miljø, men karakteriserer immunresponsen mot infeksjonen, overvåker effekten av terapi, og kurenheten blir vanskelig å bevise. Derfor bør pasienten med hepatitt B eller med nærvær av diagnostiske kriterier i sin favør utføres polymerasekjedereaksjon for å kvantifisere antall virale partikler i blodet. Diagnostisk frekvens er mangelen på kopier av DNA fra infeksjonen.

Beskrivelse av diagnosemetoden

Den svært sensitive metoden for PCR-diagnose av hepatitt B tilhører kategorien genetisk utviklede molekylærbiologiske studier. Gjennom det bestemmes mengden av virus DNA i det biologiske materialet til pasienten og den tillatte hastigheten. I henhold til de oppnådde resultatene er antall viruspartikler per voluminnhold etablert. Materialet til den diagnostiske testen er pasientens venøse blod. Et inntak er ønskelig på tom mage på grunn av den mulige effekten av chyleserum på resultatet av studien.

Resultatene som er oppnådd, må gis til legen for tolkning og bestemmelse av videre taktikk. Uavhengig dekoding representerer ikke diagnostisk verdi.

Betydningen av resultatet av antall viruspartikler oppnådd ved PCR-metoden overskrider verdien av enzymimmunoassays. Siden analysen i sanntidsmodus viser tilstedeværelsen av sykdomsfremkallende middel i blodet, er innholdsinformasjonen høyere enn andre. Hvis ELISA bare indikerer tilstedeværelse av antistoffer, som observeres fra 4 ukers inkubasjonsperiode og varer mer enn 8 uker etter viruseliminering fra blodet, så bekrefter polymerasekjedereaksjonen klart sykdomsaktiviteten eller dens kur, karakteriserer dynamikken til den foreskrevne terapien.

Polymerasekjedereaksjon med kvantitativ bestemmelse av patogenpartikler løser diagnostiske spørsmål til fordel for å stoppe behandlingen på grunn av gjenoppretting eller fortsettende behandling på grunn av manglende effektivitet. Metoden er så spesifikk som mulig for HBV-viruset og utmerker seg ved en akseptabel feil.

Indikasjoner og resultatmål

Kvantitativ analyse av hepatitt B er den mest pålitelige og lar deg bekrefte dataene som er oppnådd ved hjelp av ELISA-metoder. Han er utnevnt når:

1. oppnå et positivt diagnostisk resultat av ELISA;
2. behandle en pasient med en fast diagnose av viral leverskade
3. i diagnosen hepatitt blandet etiologi;
4. om nødvendig, bestem virusbelastningen hos en pasient.

Siden enzymet immunoassay-metoden brukes mer omfattende i praksis med en smittsom spesialist, kan enkelte pasienter med mild sykdom behandles uten å telle viralbelastningen. Men PCR regnes generelt som "gullstandarden" for diagnostikk i hepatologi, da det på grunn av det unike resultatet av det fjerner en rekke organisatoriske problemer. Derfor har pasientens retning for kvantitativ analyse følgende mål:

• oppnå data om antall virale partikler i pasientens blod;
• bekreftelse av den akutte løpet av hepatitt og rettidig verifisering av kronisk sykdom;
• konstant deteksjon av latente virusbærere med positive ELISA-tester, overvåking av deres viremia;
• avgjøre om utnevnelse av antiviral behandling, kombinasjon og avslutning.

Det viktigste målet med å anvende en kvantitativ PCR-test for å oppdage HBV er å identifisere mulige kombinasjoner av behandling. I tilfelle av høy viral belastning gir analysens resultat spesialisten muligheten til å fortsette med kombinasjonen av legemidler. Under behandling er det enkelt å bestemme effektiviteten av den foreskrevne farmakologiske behandlingen basert på resultatet av PCR. Kun guidet av dataene for immunanalysemetoder, er det umulig å avgjøre om behandling og dagens effektivitet er rettet. Derfor er en kvantitativ sanntidsprøve en nødvendig analyse før behandling med akutt hepatitt, latent virusinfeksjon med høy viremia og kronisk HBV påbegynnes.

Tolkning av kvantitative PCR-testresultater

Fortolkningen av resultatene av den kvantitative PCR-testen skal utføres av pasientens behandlende lege. Det er nødvendig å evaluere diagnostisk indikator og bestemme terapeutisk taktikk.

En standardanalysator er i stand til å produsere en kvantitativ indikator som reflekterer antall kopier av viralt DNA som er tilstede i det studerte venøse blodet. Måleenheter - kopier / ml, IE / ml (kopier per milliliter, internasjonale enheter per milliliter). Tolkningen av resultatene er gitt i tabellen med indikasjon på ulike måleenheter.

Studier av hepatitt B-viruset (ELISA og PCR)

Hepatitt B-virus "s" antigen (HBsAg)

Hepatitt B overflateantigen i serum er normalt fraværende.
Påvisning av hepatitt B overflateantigen (HBsAg) i serum bekrefter akutt eller kronisk infeksjon med hepatitt B-viruset.

Ved akutt sykdom detekteres HBsAg i serum i de siste 1-2 ukene av inkubasjonsperioden og de første 2-3 ukene i klinisk periode. Sirkulasjon av HBsAg i blodet kan være begrenset til noen dager, så du bør strebe etter en tidlig undersøkelse av pasientene. ELISA-metoden tillater å oppdage HBsAg hos mer enn 90% av pasientene. Nesten 5% av pasientene oppdager ikke de mest sensitive undersøkelsesmetodene HBsAg, i slike tilfeller er etiologien for viral hepatitt B bekreftet ved tilstedeværelse av anti-HBcAg JgM eller PCR.

Serum HBsAg-konsentrasjonen i alle former for hepatitt B-alvorlighetsgrad ved sykdommens høyde har et betydelig spekter av svingninger, men det er et bestemt mønster: I den akutte perioden er det et invers forhold mellom serum-HBsAg-konsentrasjonen og sykdommens alvorlighetsgrad.

Høye konsentrasjoner av HBsAg er vanligere i milde og moderate former av sykdommen. I alvorlige og ondartede former er konsentrasjonen av HBsAg i blodet ofte lav, og i 20% av pasientene med alvorlig form og i 30% med et malignt antigen i blodet, kan det ikke oppdages i det hele tatt. Utseendet på denne bakgrunn hos pasienter med antistoffer mot HBsAg betraktes som et ugunstig diagnostisk tegn; Det er bestemt i ondartede former for hepatitt B.

I den akutte løpet av hepatitt B, reduseres konsentrasjonen av HBsAg i blodet gradvis til fullstendig forsvunnelse av dette antigenet. HBsAg forsvinner hos de fleste pasienter innen 3 måneder fra starten av en akutt infeksjon.

En reduksjon i konsentrasjonen av HBsAg med mer enn 50% ved slutten av den tredje uken av den akutte perioden, som regel, indikerer en tett fullføring av infeksjonsprosessen. Vanligvis hos pasienter med høy konsentrasjon av HBsAg ved sykdommens høyde, det oppdages i blodet i flere måneder.
Hos pasienter med lave konsentrasjoner av HBsAg forsvinner mye tidligere (noen ganger flere dager etter sykdomsutbruddet). Generelt går tiden for HBsAg-deteksjon fra flere dager til 4-5 måneder. Maksimal deteksjonsperiode for HBsAg med en jevn løpet av akutt hepatitt B, overstiger ikke 6 måneder fra sykdomsbegyndelsen.

HBsAg kan finnes hos friske mennesker, som regel i profylaktiske eller utilsiktede studier. I slike tilfeller undersøkes andre markører av viral hepatitt B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg, og leverfunksjonen studeres.

Ved negative resultater er det nødvendig med gjentatte studier på HBsAg.
Hvis gjentatte blodprøver i mer enn 3 måneder avslører HBsAg, klassifiseres denne pasienten som en kronisk pasient med viral hepatitt B.
Tilstedeværelsen av HBsAg er ganske vanlig. Det er mer enn 300 millioner luftfartsselskaper i verden, og i vårt land er det rundt 10 millioner transportører.
Oppsigelse av HBsAg-sirkulasjon med etterfølgende serokonversjon (dannelse av anti-HBs) indikerer alltid gjenoppretting - sanering av kroppen.

En blodprøve for tilstedeværelsen av HBsAg brukes til følgende formål:

for diagnostisering av akutt hepatitt B:

• inkubasjonsperiode;
• akutt sykdom;
• tidlig utvinning;
  

for diagnostisering av kronisk viral hepatitt B;

for sykdommer:

• vedvarende kronisk hepatitt;
• levercirrhose;

for screening og identifisering av pasienter i risikogrupper:

pasienter med hyppige hemotransfusjoner;

pasienter med kronisk nyresvikt

pasienter med flere hemodialyser

pasienter med immunsviktstilstander, inkludert AIDS.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatene av studien uttrykkes kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av serum HBsAg. Et positivt resultat - identifiseringen av HBsAg indikerer en inkubasjon eller akutt periode med akutt viral hepatitt B, samt i kronisk viral hepatitt B.

Antistoffer mot nukleært antigen av hepatitt B-virus JgG (anti-HBcAg JgG)

Normalt er serum anti-HBcAg fraværende i serum.
Hos pasienter med anti-HBcAg forekommer JgG i den akutte perioden med viral hepatitt B og vedvarer hele livet. Anti-HBcAg JgG er den ledende markøren for overført HBV.

Blodprøver for anti-HBcAg JgG brukes til å diagnostisere:

kronisk viral hepatitt B i nærvær av HBs-antigen i serumet;

viral hepatitt B.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av serum anti-HBcAg JgG. Et positivt resultat - identifiseringen av anti-HBcAg JgG indikerer en akutt infeksjon, konvalescens eller tidligere overført virus hepatitt B.

Hepatitt B-virus "e" antigen (HBeAg)

Normalt er HBeAg i serum fraværende.
HBeAg kan finnes i serum hos de fleste pasienter med akutt viral hepatitt B. Det forsvinner vanligvis i blodet før HBs-antigenet. Et høyt nivå av HBeAg i de første ukene av sykdommen eller dets deteksjon i mer enn 8 uker gir grunn til å mistenke en kronisk infeksjon.

Dette antigenet oppdages ofte i kronisk aktiv hepatitt av viral etiologi. Av spesiell interesse for definisjonen av HBeAg er det faktum at dets deteksjon karakteriserer den aktive replikative fase av den smittefarlige prosessen. Det er blitt fastslått at høye konsentrasjoner av HBeAg korresponderer med høy DNA-polymeraseaktivitet og karakteriserer aktiv replikasjon av viruset.

Tilstedeværelsen av HBeAg i blodet indikerer sin høye infektivitet, dvs. Tilstedeværelsen av aktiv hepatitt B infeksjon i kroppen blir undersøkt, og detekteres bare i nærvær av HBs antigen i blodet. Hos pasienter med kronisk aktiv hepatitt brukes antivirale legemidler bare når HBeAg detekteres i blodet. HBeAg - antigen - en markør for den akutte fasen og replikasjon av hepatitt B-viruset.

En blodprøve for tilstedeværelse av HBe-antigen brukes til å diagnostisere:

inkubasjonsperiode for viral hepatitt B;

prodromal periode av viral hepatitt B;

akutt periode med viral hepatitt B;

kronisk vedvarende viral hepatitt B.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av serum HBeAg. Et positivt resultat - detektering av HBeAg indikerer en inkubasjon eller akutt periode med akutt viral hepatitt B eller den fortsatte replikasjonen av viruset og infeksjonen hos pasienten.

Antistoffer mot antigenet "e" av hepatitt B-viruset (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg i serum er normalt fraværende. Utseendet til anti-HBeAg-antistoffer indikerer vanligvis intensiv fjerning fra kroppen av hepatitt B-viruset og mindre infeksjon av pasienten.

Disse antistoffene opptrer i den akutte perioden og varer ved opptil 5 år etter infeksjonen. Ved kronisk vedvarende hepatitt er anti-HBeAg funnet i pasientens blod sammen med HBsAg. Serokonversjon, dvs. Overgangen av HBeAg til anti-HBeAg, med kronisk aktiv hepatitt, oftere prognostisk gunstig, men den samme serokonversjonen forbedrer ikke prognosen for alvorlig cirrotisk levertransformasjon.

Blodprøver for tilstedeværelse av anti-HBeAg brukes i følgende tilfeller i diagnosen av viral hepatitt B:

etablere den første fasen av sykdommen;

akutt infeksjon;

tidlig utvinning;

rekonvalesens;

sen stadium gjenoppretting.

diagnose av nylig overført virus hepatitt B;

diagnose av kronisk vedvarende viral hepatitt B.

Evaluering av forskningsresultater

Resultatet av studien er uttrykt kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet av antistoffer mot HBeAg i serum. Et positivt resultat er deteksjon av antistoffer mot HBeAg, noe som kan indikere begynnelsestrinnet av akutt viral hepatitt B, den akutte infeksjonsperioden, tidlig stadium av konvalescens, konvalescens, nylig overført virus hepatitt B eller vedvarende viral hepatitt B.

Kriteriene for tilstedeværelse av kronisk hepatitt B er:

detektere eller periodisk detektere HBV DNA i blodet;

kontinuerlig eller periodisk økning i aktiviteten av ALT / AST i blodet;

Morfologiske tegn på kronisk hepatitt ved histologisk undersøkelse av leverbiopsi.

Påvisning av hepatitt B-virus ved PCR (kvalitativt)

Hepatitt B-virus i blodet er normalt fraværende.
Den kvalitative bestemmelsen av hepatitt B-viruset ved PCR-metoden i blodet gjør det mulig å bekrefte tilstedeværelsen av viruset i pasientens kropp og derved fastslå sykdommens etiologi.

Denne studien gir nyttig informasjon for diagnostisering av akutt viral hepatitt B i inkubasjon og tidlig utviklingsstadier av sykdommen, når pasientens viktigste serologiske markører i blodet kan være fraværende. Serum viralt DNA påvises hos 50% av pasientene i fravær av HBeAg. Den analytiske følsomheten til PCR-metoden er ikke mindre enn 80 viruspartikler i 5 μl, den siste DNA-deteksjonsprøven, spesifisitet - 98%.

Denne metoden er viktig for å diagnostisere og overvåke løpet av kronisk HBV. Ca 5-10% tilfeller av cirrhose og andre kroniske leversykdommer er forårsaket av kronisk bærer av hepatitt B-virus. Markører av aktiviteten til slike sykdommer er tilstedeværelsen av HBeAg og DNA av hepatitt B-virus i blodet.

PCR-metoden gjør det mulig å bestemme i blodet DNA av hepatitt B-viruset både kvalitativt og kvantitativt. Det fastlagte fragmentet i begge tilfeller er den unike DNA-sekvensen av genet for det strukturelle protein i hepatitt B-viruset.

Deteksjon av hepatitt B-virus DNA i biomaterialer ved bruk av PCR er nødvendig for:

oppløsning av tvilsomme serologiske testresultater;

påvisning av akutt stadium av sykdommen sammenlignet med tidligere infeksjon eller kontakt;

kontrollere effekten av antiviral behandling.

Forsvinnelsen av hepatitt B-DNA fra blod er et tegn på effekten av behandlingen

Påvisning av hepatitt B-virus ved PCR (kvantitativ)

Denne metoden gir viktig informasjon om intensiteten i utviklingen av sykdommen, effektiviteten av behandlingen og utviklingen av resistens mot aktive stoffer.
For diagnostisering av viral hepatitt ved PCR i serum, brukes testsystemer, hvor følsomheten er 50-100 eksemplarer i en prøve, som gjør det mulig å oppdage viruset i en konsentrasjon på 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopier / ml. PCR i viral hepatitt B er definitivt nødvendig for å bedømme virusreplikasjon.

Serum viralt DNA påvises hos 50% av pasientene i fravær av HBeAg. Blodserum, lymfocytter og hepatobiopsi kan tjene som materiale for å detektere DNA fra hepatitt B-virus.

• Vurdering av nivået av viremia er som følger:
• mindre enn 2,10 ^ 5 kopier / ml (mindre enn 2,10 ^ 5 IE / ml) - lav viremi;
• fra 2,10 ^ 5 kopier / ml (2,10 ^ 5 IE / ml) til 2,10 ^ 6 kopier / ml (8,10 ^ 5 IE / ml) - medium viremi;
• mer enn 2,10 ^ 6 kopier / ml - høy viremi.

Det er et forhold mellom utfallet av akutt viral hepatitt B og konsentrasjonen av HBV DNA i pasientens blod. Med et lavt nivå av viremia er prosessen med kronisering av infeksjonen nær null, med gjennomsnittlig prosessen er kronet hos 25-30% av pasientene, og med høyt nivå av viremia blir akutt viral hepatitt B oftest kronisk.

Indikasjonene for behandling av kronisk HBV interferon-alfa bør betraktes som tilstedeværelse av markører med aktiv viral replikasjon (påvisning av HBV HBV, HBeAg og HBV DNA i blodserumet i løpet av de foregående 6 månedene.).

Kriteriene for å evaluere effektiviteten av behandlingen er forsvinden av HBEAg og HBV DNA i blodet, som vanligvis ledsages av normalisering av transaminase nivåer og langvarig remisjon av sykdommen, HBV DNA forsvinner fra blodet ved den femte behandlingsmåneden hos 80% av pasientene. Å redusere nivået av viremia med 85% eller mer innen tredje dag fra starten av behandlingen sammenlignet med baseline er et raskt og forholdsvis nøyaktig kriterium for å forutsi effektiviteten av behandlingen.

PCR-analyse for hepatitt B

DNA-viruset fra Hepadnaviridae-familien er det direkte årsaksmidlet til hepatitt B. PCR-analyse av hepatitt B tillater tilstedeværelse av et infisert DNA-virus som skal detekteres i en pasients blod. Resultatet av en positiv type på HBV DNA viser tilstedeværelsen av infeksjon i pasientens blod. Det skal bemerkes at diagnosen ved bruk av PCR-analyse tillater ikke bare å bestemme tilstedeværelsen av infeksjon, men også dens kvantitative belastning og aktivitet. Denne metoden er pålitelig, nøyaktig og reproduserbar. Kvantifisering av HBV-DNA med qPCR kan brukes til å overvåke effekten av HBV-terapi og være nyttig for å forstå den naturlige historien til HBV i et endemisk område.

Infeksjonsprosessen med hepatitt B oppstår ved hjemmekontakt eller seksuell kontakt - ved direkte kontakt med infisert blod. Etter infeksjon kommer viruset i leveren celler, der det fortsetter sin aktive reproduksjon. Gjennom blodbanen spredes patogene celler gjennom hele kroppen. Det er verdt å merke seg at hepatitt B-celler er svært motstandsdyktige mot syre og høy temperatur. Han er i stand til å opprettholde sine skadelige egenskaper i seks måneder.

Typer av PCR for hepatitt B

Hittil finnes det to typer diagnostikk som foreskrives hvis du mistenker tilstedeværelsen av hepatitt B-virus: kvalitativ PCR (lar deg bestemme med 100% nøyaktighet av tilstedeværelsen av viruset i blodet) og kvantitativ PCR (lar deg bestemme graden av virusaktivitet).

PCR av høy kvalitet er foreskrevet hvis det er mistanke om HBV-infeksjon, eller hvis andre diagnostiske metoder ikke har gitt klare resultater. Denne typen PCR-analyse er ekstremt lett å dechiftere: negativ (ingen virus oppdaget i blodet), positiv (virus oppdaget i blodet). Hovedoppgaven med kvalitativ analyse er å bestemme tilstedeværelsen av infiserte celler i de tidlige stadiene av sykdommen. Hvis viruset ble diagnostisert to uker etter den påståtte infeksjonen, vil effektiviteten av behandlingen bli mye høyere. Hvis viruset i blodet er omtrent to måneder, blir sykdommen kronisk, og kan derfor ikke fullstendig herdes.

Hvis en kvalitativ diagnose bekrefter tilstedeværelsen av HBV i blodet, foreskriver legen en kvantitativ analyse.

Kvantitativ analyse tillater å bestemme aktiviteten av utviklingen av viruset i pasientens kropp. Denne typen PCR-analyse er tildelt:

• å bestemme scenen av sykdommen;
• å overvåke effektiviteten av den anvendte terapien;
• å bestemme nivået på resistens av viruset til et bestemt legemiddel;
• for valg av rusmidler.

Kvantitative indikatorer på viruset i blodet måles i IE per milliliter eller DNA per milliliter.

Hvis legen foreskriver en kvantitativ diagnose umiddelbart, uten å sjekke det kvalitative, blir 75 IE per milliliter regnet som normen. Hvis færre internasjonale enheter oppdages, er resultatet at HBV ikke oppdages når tallene er over normale, er tilstedeværelsen av viral hepatitt B diagnostisert.

Tolkning av kvantitativ diagnose

Følgende indikatorer (i eksemplarer / milliliter) anses å være normen for CRP i hepatitt B: mindre enn 10 3 - inaktivt virus; fra 10 4 til 10 5 - viruset er vanligvis inaktivt; 10 6 - aktivt virus; 10 7 - et virus i et høyt aktivitetsstadium.

Basert på kvantitative indikatorer kan man med 100% nøyaktighet bestemme sykdomsformen (bærer, akutt eller kronisk), reaksjonen av viruset til behandling, behovet for ytterligere diagnostikk.

Den kroniske formen for hepatitt B er etablert dersom aktiviteten til viruset er 10 5 kopier per milliliter. En transportør er diagnostisert dersom poengene er under 10 5 eksemplarer per milliliter.

I behandlingsperioden er det nødvendig å gjenta kvantitativ diagnostikk regelmessig (en gang hver tredje måned) for å vurdere i tide perioden da viruset utvikler immunitet mot de brukte legemidlene og endrer metoden. Hvis alle studier har blitt utført riktig og en effektiv behandling er valgt, vil en gjentatt analyse (etter tre døgners behandling) vise en reduksjon i aktiviteten av patogene celler med minst åttifem prosent.

En leverbiopsi utføres bare i tilfelle når seks måneders behandling har vist at ALT-nivåene er dobbelt så høy som normalt, og PCR-diagnostikk viser lavere enn 10 5 kopier per milliliter blod.

Forbereder undersøkelsen

Venøst ​​blod er nødvendig for analyse. For å få de mest nøyaktige resultatene, er det nødvendig å forberede prosedyren: nekte å ta mat minst åtte timer før blodinnsamling; i to dager for å nekte narkotikabehandling (det er viktig å advare legen om å ta stoffene); Du må bruke tjue minutter i hvilemodus før du donerer blod; Tolv timer før prosedyren, gi opp idrettsøvelser, alkoholholdige drikker, røyking og å spise fettstoffer.

Det er viktig: hvis diagnosen er nødvendig for et barn under fem måneder, må han gi et glass kokt vann hvert tiende seksti minutter før blodinnsamlingsprosedyren.

Oppsummering

PCR-analyse for hepatitt B i dag er den mest nøyaktige metoden for å diagnostisere et virus. Metoden tillater å bestemme de muterte og skjulte former for sykdommen, for å diagnostisere sykdommen i de første infeksjonsdagene, for å velge den mest effektive behandlingen. Laboratorieassistenten sammenligner resultatene av analysen med normen, og bringer dem til konklusjonen. Data behandles innen to uker. For å få en henvisning til PCR-analyse, er det nødvendig å kontakte en hepatolog, en smittsom spesialist eller en virologist. Det er viktig å huske at jo hurtigere du kommer til legen, desto raskere blir resultatet oppnådd, jo mer effektive behandlingen blir det.

Forklaring av PCR og biokjemisk analyse av hepatitt

Hepatitt er en betennelsesprosess i leveren som skyldes ødeleggelsen av cellene av giftige stoffer. Dekryptere analysen for hepatitt gjør det mulig å objektivt dømme helsetilstanden til en pasient som lider av leversykdom. Den smittefarlige legen vil fortelle deg hvordan du skal forstå resultatene av studien, og foreskrive videre behandling. Pasienten, som selvstendig har studert dataene som er innhentet, trekker visse konklusjoner, som ikke alltid samsvarer med virkeligheten.

Hepatitt B-virus er inneholdt i serumet og spesifikke laboratoriediagnostiske metoder tillater deteksjon av patogenantigener og antistoffer mot det.

Liste over hepatittester

Diagnosen av viral betennelse i leveren er bekreftet av spesielle studier. Før pasienten gjennomgår en behandling, testes pasienten:

1. Pasienten gir blod til forskning om morgenen, mellom kl. 07.00 og 9.00. Pasienten bør avstå fra å spise i 12 timer. Kvantitativ analyse av hepatitt B bestemmer tilstedeværelsen av viruset og antistofftiteren i serumet. Samtidig foreskriver legen en studie som identifiserer HBV DNA ved hjelp av PCR-reaksjoner.
2. Ved infiserte pasienter etableres tilstedeværelse av anti-HBc IgG protein og HBsAg antigen. Spesifikt immunoglobulin indikerer en rask økning i konsentrasjonen av hepatittvirus i pasientens serum. I tilfelle en negativ test for anti-HBc utføres IgG ytterligere undersøkelser av tilstedeværelsen av andre sykdommer.
3. Ved å studere perioden for eksacerbasjon av sykdommen bestemmer de immunoglobulinerne HBeAg og anti-HBc IgM. Etablering av riktig diagnose er mulig først etter oppdagelsen av viral RNA - hepatitt i dette tilfellet er bekreftet av den molekylærbiologiske metoden.
4. PCR er mye brukt til diagnose av leversykdom - en kvantitativ metode lar deg foreskrive en effektiv behandling av hepatitt.

Immunologisk studie

Å fastslå pasientens evne til å håndtere et farlig virus, diagnostiserer nivået av kroppsresistens. På grunn av hele laboratoriekomplekset er det fastslått kvantitative og kvalitative indikatorer for immunologiske faktorer - antistoffer mot hepatitt B.

HBsAg-proteinet er et overflateantigen som er en komponent av patogenens superkapslede (virale konvolutt). Hovedfunksjonen er deltakelse i prosessen med virusadsorpsjon av friske leverceller. HBsAg-peptid er bestandig mot miljøfaktorer - alkali (Ph = 10), 2% løsning av kloramin og fenol.

HBsAg-markøren er tilstede i serum av en infisert person. Umiddelbart etter utseendet, oversetter RNA ikke bare sin syntese, men inneholder også kjerne Ar-partikler fra tidligere markør. Det er bevis på utviklingen av den aktive fasen av hepatitt.

Tilstedeværelsen av HBeAg i en kronisk pasient indikerer begynnelsen av den aktive fase av den smittefarlige prosessen.

Anti-HBc-markør inneholder 2 typer antistoffer - IgG og IgM. Dette er et protein som er spesifikt for ett antigen. Den akutte form av sykdommen er preget av tilstedeværelsen av anti-HBc og IgM. Deres positive verdi indikerer en tidligere leversykdom.

Kvantitativ analyse

For å bestemme aktiviteten til patogenet forskrive PCR analyse. Det setter nivået på viral belastning og sjansene for pasienten å gjenopprette. Polymeraskjedereaksjonen utføres etter utløpet av latent perioden. I forskningsprosessen bestemmes ikke bare HBsAg, men også HBeAg-markøren.

Dekoding av PCR-analysen for hepatitt gjør at du kan bestemme aktivitetsgraden av den patologiske prosessen og effektiviteten av kompleks terapi.

Legen bestemmer hvor følsomt pasientens kropp er for antivirale legemidler, og om det kan treffes tiltak for å eliminere årsakene til kronisk leversykdom. I dette tilfellet øker transaminaseindeksen, og aktivitetsindeksen for forårsakende middel er flere ganger høyere enn den normale indeksen, og aminosyrekonsentrasjonen er mer enn 106 kopier av DNA per ml.

Transaminasestandarden i blodet tilsvarer verdiene for enzymene AsAT og AlAT. Alaninaminotransferase hos kvinner overstiger ikke 32 U / l, og hos menn - 40 U / l. Konsentrasjonen av viruset for mennesker smittet i tidlig alder er 100.000 eksemplarer per ml.

I virusets inaktive fase og i tilfelle anti-HBc er HBV DNA i området 2000 IE / ml, og antall kopier overstiger ikke 10.000.

Molekylær hybridiseringsmetode

ELISA-responsen på hepatitt bestemmer typen av antigen med antistoffer og enzymer. Fasedforskning er akseptabelt, men bare en spesialist som har mottatt et analyseresultat i tide, kan gjøre den riktige diagnosen.

Markører av viral hepatitt under immunoassay er HBsAg, Anti-Hbcor IgM. Ved sykdommens begynnelse øker de: PPBR-1.55, OPcr-0.27, HBsAg er 1.239, virus-DNA blir ikke detektert. Etter behandling indikerer resultatet av analysen en reduksjon i HBsAg til 1,07, og HBeAg blir negativ. Virus DNA er tilstede.

Hvis negative IgM, IgG, IgA-verdier oppnås - det er nødvendig å avgjøre om sykdommen er fraværende eller en fullstendig utvinning har skjedd.

En positiv IgG-verdi indikerer en fullstendig immunitet. I dette tilfellet er ikke IgM detektert. Det er viktig å vite at en studie på hepatitt avslører en høy IgM titer.

I den akutte perioden av sykdommen vises negative IgG-verdier. Fjernelse av en virussykdom ledsages av et negativt immunoglobulin IgM. ELISA er relativt enkelt og trygt for pasientens helse.

Biokjemisk blodprøve

Studien av serum identifiserer patologi i kroppen, spesifiserer diagnosen, lar deg evaluere leveransens arbeid og få informasjon om stoffskiftet. Biokjemisk analyse utføres om morgenen. For forskning ved bruk av materiale som er avledet fra venøst ​​blod.

Det er viktig å følge reglene for forberedelse for testing for hepatitt C - i dette tilfellet vil dekoding av alle indikatorer ikke forvrenges. Totalt bilirubin er normalt 8,55-20,2 mmol / l, og økningen indikerer utseendet av leversykdom. Verdier av AlAT og Asat øker også i tilfelle hepatitt B.

Albumin i en sunn pasient er 35-55 g / l. Lavt plasmaproteinnivå indikerer viral betennelse i leveren.

Den normale LDH-indeksen ligger i området 125-250 U / l, og veksten betyr deformasjon og ødeleggelse av cellene i det syke organet. Indikatoren for LDH (sorbitol dehydrogenase) indikerer tilstanden til leverenvevet. Den normale verdien er 0-1 U / l. Vekstraten er en karakteristisk komponent i den akutte løpet av hepatitt B eller overgangen til kronisk stadium.

Protein GGG har lav aktivitet i blodplasmaet.

Dens vekst observeres ved betennelse i leveren og fortsetter i lang tid. Norm - 25-49 U / l for menn, for kvinner, indikatoren er betydelig lavere - 15-32 U / l.

Dekoding av kroniske hepatitt B tegn

Identifikasjon av markører av leversykdom er hovedoppgaven til legen, som søker å forhindre feil i diagnosen. Det er viktig å vite at følgende fysiologiske faktorer påvirker analyseresultatet:

En tabell med antigener og deres dekoding vil tillate pasienten å få en ide om sykdommens art.

Typer av PCR for hepatitt B og tolkning av resultatene

Polymerase kjedereaksjon er en type blodprøve som nøyaktig kan oppdage hepatitt B-viruset. En egenskap ved metoden er at den kan vise HBV i sine tidlige stadier - en måned etter infeksjon, mens et bestemt antigen oppdages hos en pasient bare etter 2 måneder. PCR kan detektere ikke bare et normalt DNA-virus, men også mutantstammer som ingen annen analyse kan se.

Ved dekoding av PCR for hepatitt B, blir resultatene sammenlignet med standardverdier. Basert på dette blir det konklusjoner om forekomsten av sykdommen (positivt resultat), konsentrasjonen av viruset (aktivitet) eller fraværet av sykdommen (negativt resultat). Databehandling er 2 uker.

Typer av PCR for viral hepatitt B

Det finnes 2 typer diagnostikk som er foreskrevet for hepatitt B. Høykvalitets PCR gjør det mulig med 100% nøyaktighet å si om HBV er i blodet eller ikke. Kvantitativ PCR viser aktiviteten til viruset, det vil si hvor mye HBV DNA er inneholdt i 1 ml blod.

PCR av høy kvalitet og dens tolkning

En blodprøve for hepatitt B ved PCR kan bare oppdage nærvær av DNA-fragmenter. Utnevnt i tilfelle når pasienten mistenker HBV-infeksjon (HBV) eller andre diagnosemetoder, gir serologiske tester ikke et klart svar. Dekoding av resultatene ved utførelse av en kvalitativ analyse er veldig enkel:

• negativt resultat - ingen virus;
• positivt resultat - virus oppdaget.

Formålet med høyverdig PCR er å bekrefte eller nekte tilstedeværelsen av hepatitt B-viruset, samt å foreta en tidlig diagnose. Hvis HBV oppdages innen 1-2 uker etter infeksjon, vil behandlingen være så effektiv som mulig. Med den aktive utviklingen av HBV i 2 måneder og over, blir sykdommen kronisk og kan ikke fullstendig herdes.

I tilfelle hvor høykvalitets PCR for hepatitt indikeres ved tilstedeværelse av et virus, er neste trinn å gjennomføre en kvantitativ diagnose.

Kvantitativ PCR

For å effektiv behandling eller evaluering av resultatene av terapi, er det ikke bare å vite at pasienten har HBV. Det er nødvendig å kvantifisere verdien av DNA fra hepatitt B-virus i 1 ml blod, det vil si den virale belastningen på kroppen. Denne type PCR for hepatitt B utføres i følgende tilfeller:

1. Før du foreskriver behandling.
2. For å vurdere effektiviteten av behandlingen.
3. For å bestemme utviklingen av virusresistens mot de medikamenter som er tatt.
4. Å bestemme scenen hvor sykdommen ligger.

Måleenheten for et virus er internasjonale enheter (IE / ml) eller antall DNA-kopier / ml, det vil si antallet DNA-fragmenter per 1 ml blod. Forholdet mellom de to enhetene avhenger av det valgte testsystemet og varierer fra 2 til 7 kopier / ml i 1 IE / ml. Hvis systemet er ukjent, brukes den gjennomsnittlige verdien for konvertering:

1 IE / ml = 5 kopier / ml

Hvis kvantitativ analyse gjøres umiddelbart, er marginalen for diagnostisering av sykdommen 75 IE / ml. Når resultatet er over denne indikatoren, gjøres diagnosen av HBV, under - HBV er ikke detektert.

Behandling av kvantitativ PCR

I hepatitt B er følgende virusvekt (viremia) verdier, kopier / ml, PCR-standardene:

• 10 ^ 5 kopier / ml. Når det med en stor viral aktivitet er en økning i ALT-nivået oftere 2 ganger på seks måneder, så er antiviral terapi umiddelbart foreskrevet.

For å finne ut hvordan DNA-hepatitt vil oppføre seg når det gjelder kronisk tilstand, det vil si overgangen til kronisk form fra akutt, blir resultatene av PCR-diagnostikk også brukt:

• HBV DNA med 2 x 10 ^ 6 kopier / ml betyr at oppkjøpet av den kroniske formen av sykdommen er uunngåelig.

Forbereder undersøkelsen

For å bestemme tilstedeværelsen av HBV ved PCR, tas blod fra en blodåre. Prosedyren utføres alltid strengt på tom mage, og det er best å komme til laboratoriet om morgenen når den naturlige hviletiden fra mat er 8 timer. For at resultatene av undersøkelsen skal være korrekte, er det nødvendig å vite på forhånd hvordan du skal forberede deg på å gå til klinikken på riktig måte. Ytterligere trinn er som følger:

1. Avslag fra fettstoffer, røyking, alkohol og idrett i 12 timer før prosedyren.
2. Hvil i 20 minutter umiddelbart før du donerer blod.
3. Før du starter prosedyren, bør sykepleieren advares om medisinene som tas.

Advarsel! Hvis diagnosen utføres til et barn under 5 år, så en halv time før prosedyren, bør han drikke 1 glass kokt vann hvert 10. minutt.

Oppsummering

Hittil er PCR-diagnostikk for påvisning av hepatitt B den mest nøyaktige metoden. Metoden lar deg se de skjulte og muterte former for sykdommen, for å identifisere sykdommen i de første ukene etter infeksjon og følgelig å gjennomføre en effektiv behandling. Avhengig av situasjonen utføres kvalitativ eller kvantitativ PCR, som er rettet mot å detektere HBV og etablere sin aktivitet. For å bli testet må du kontakte en virolog, en spesialist i smittsomme sykdommer eller en hepatolog.

Essensen av analysen av PCR for hepatitt B og dens resultater

Viral hepatitt B behandles vellykket dersom det blir detektert i tide, og antall antistoffer og antigener i pasientens blod er korrekt bestemt. Ved hjelp av et enzymimmunoassay for hepatitt er det mulig å oppdage tilstedeværelsen av virusmarkører, men de kan ikke bestemme den nøyaktige fasen av prosessen.

For kvantitativ evaluering brukes PCR diagnostikk. Ved hjelp av testen er det mulig å telle antall markører, forutsi sykdomsforløpet og sannsynligheten for å kurere ved hjelp av antivirale legemidler.

Den største fordelen med studien er evnen til å oppdage selv minimal konsentrasjoner av viruset, for å identifisere patogenet på arterietrinnet.

Diagnose av hepatitt B

Hepatitt B-virus er svært smittsomt og motstandsdyktig mot ytre påvirkninger. Den forblir aktiv i blodet til en pasient i flere uker. Derfor er alle personer utsatt for infeksjon, selv om profylakse observeres.

For å diagnostisere sykdommen foreskrive følgende studier:

Essensen av PCR-metoden

Amerikanske kjemiker K.Mullis mottok Nobelprisen, og hans diagnostiske metode er fortsatt brukt.

Forfedre av PCR-metoden (polymerasekjedereaksjon) regnes som en forsker fra Norge H. Kleppe. Han begynte å utføre amplifikasjonen (gjenoppretting) av DNA ved hjelp av en kort kjede av DNA, det vil si en syntetisk primer (en slags kopi).

Men forskeren klarte ikke å realisere sin ide. Lignende studier ble gjort av den amerikanske kjemikeren K.Mullis, som i 1993 ble tildelt Nobelprisen for sin oppfinnelse. Siden da har PCR blitt brukt til å etablere faderskap, diagnostisere genetiske sykdommer og oppdage virus.

Essensen av reaksjonen er at ved hjelp av enzymer kopieres et bestemt stykke DNA. Du kan bare kopiere området som tilsvarer de angitte parametrene, og hvis det er i den presenterte prøven. Følgende komponenter brukes til å starte reaksjonen:

1. Matrix DNA med et nettsted som skal kopieres.
2. Primers lik i struktur til DNA.
3. Polymerase, det vil si enzymet som utløser reaksjonen. Det bør være termostabilt, det vil si å tåle temperatur ekstremer.
4. Løsning med visse parametere, slik at reaksjonen gjennomføres.

Reaksjonen utføres i flere stadier:

For deteksjon av hepatitt B brukes to typer reaksjoner: kvantitativ og kvalitativ.

Kvantitativ PCR

Den kvantitative metoden bestemmer mengden av HBV-genomet

Kvantitativ PCR involverer samtidig opprettelse av kopier av DNA-fragmenter og bestemmelse av antall molekyler. Måling utføres etter hvert trinn, det vil si i sanntid. Dette oppnås ved å bruke fluorescerende prober, som er inkludert i en kjede av molekyler og glød i en viss periode av studien.

Denne metoden brukes til å oppdage DNA-fragmenter som er markører for hepatittviruset. Ved hjelp av den kvantitative metoden er det mulig å isolere genotypen av viruset nøyaktig. Med andre ord beregnes antall kopier av HBV-genomet per pasientcelletal.

Kvantitativ analyse gir svar på følgende spørsmål:

1. Med hvilken intensitet utvikler sykdommen.
2. Hvor effektiv er behandlingen.
3. Har stoffet motstand utviklet seg?

Det er også nødvendig med kvantitativ måling for diagnosen kronisk infeksjonsfase. Hvis mengden av DNA er under 100 stk / ml ved normal transaminase, så er personen en bærer av viruset.

I den akutte fasen er mengden av antistoffer mye høyere. I antiviral terapi indikerer en økning i antall antistoffer utviklingen av resistens mot stoffet, som er et signal for å justere behandlingen.

PCR av høy kvalitet

PCR av høy kvalitet gir mindre informasjon, men kan eliminere infeksjon.

PCR av høy kvalitet kan bare opprette tilstedeværelsen av patogenet i blodet. Hvis de er fraværende, er pasienten ikke infisert, hvis patogenet kommer inn i blodet, vil resultatet bli positivt.

Imidlertid er det ved hjelp av kvalitativ reaksjon umulig å avklare virusets genom, sykdomsstadiet. Derfor, for diagnostisering av HBV utført både kvantitativ og kvalitativ måling.

Forbereder undersøkelsen

Venøs blod er nødvendig for PCR-analysen. Dette må gjøres om morgenen på tom mage.

Pasienten skal riktig forberede seg på studien:

1. I 10 timer å nekte mat, kan du bare drikke rent vann.
2. På kvelden for å slutte å ta alkohol, i 4 timer for ikke å røyke.
3. Før undersøkelsen bør unngå fysisk og følelsesmessig stress.
4. Ikke bruk medisinering i 2 dager, hvis dette ikke er mulig, er det nødvendig å varsle laboratorietekniker. Noen stoffer har en effekt på sluttresultatet.

Tolkning av data

I en kvantitativ reaksjon evalueres de oppnådde indikatorene avhengig av antall DNA-kopier.

Det er enkelt å tolke kvalitetsmåledata. Han gir enten et positivt eller negativt svar.

I en kvantitativ reaksjon kan de oppnådde indikatorene estimeres avhengig av antall DNA-kopier. Måleenhet er kopier / ml.

Dataene dekodes som følger:

1. Hvis mengden HBV DNA er mindre enn 90, er infeksjonen fraværende. Pasienten utviklet immun immunitet etter vaksinasjon, eller han ble kurert av sykdommen.
2. Når antall kopier 2x100 snakker om bæreren av viruset.
3. Tallet 2x106 indikerer et kronisk stadium av sykdommen.
4. Med DNA mer enn 2x109 har pasienten et akutt stadium av hepatitt.

Feilfulle resultater

Fordelene ved den diagnostiske metoden ved anvendelse av polymerase-reaksjoner er som følger:

1. Direkte deteksjon av patogener. I motsetning til dette gir ELISA informasjon om tilstedeværelsen av antistoffer mot viruset.
2. Spesifisitet. Det vil si at det er DNA-regionen som er tilstede i biomaterialprøven som kopieres.
3. Overfølsomhet. Metoden kan til og med oppdage enkeltcellede fragmenter.
4. Diagnose av sykdommer i akutt og latent stadium. Det vil si at det er mulig å diagnostisere sykdommen på scenen av prekliniske manifestasjoner.

Metoden har feil som fører til falske resultater. Den viktigste ulempen er sannsynligheten for forurensning av materialet. Den viktigste forurensningskilden er dårlig bearbeidede reagensrør, laboratoriehender, reagenser.

En del av DNA fra en tidligere reaksjon kan komme inn i blodet. Derfor er det lagt til økte hygienekrav på laboratorier: separate rom, plastrør, ultrafiolett behandling av laboratorier mv.

Falske negative resultater kan skyldes redusert følsomhet av reaksjonen. Dette skjer i følgende situasjoner:

• pasienten tar medisiner, for eksempel antikoagulantia;
• personen fikk fysisk stress før analysen (spiller sport, hardt arbeid);
• infeksjon har skjedd nylig.

Hvis pasienten har stor sannsynlighet for infeksjon, og resultatet av studien er negativt, må han undersøkes igjen.

Se også:

konklusjon

Polymerasekjedereaksjonsmetoden er den viktigste og mest informative for diagnosen av HBV. Det gjør det ikke bare mulig å fastslå infeksjonsoperatørstatusen, men også for å avklare scenen av sykdommen, for å evaluere resultatene av behandlingen.

For en mer nøyaktig diagnose brukes en kvalitativ og kvantitativ måling. Ulempene ved metoden inkluderer sannsynligheten for forurensning, redusert følsomhet og en ganske høy pris.

For at resultatene skal være mest pålitelige, bør man ordentlig forberede seg til studien og gjennomføre den i klinikken med riktig lisens og godt omdømme.

Hepatitt B DNA og PCR

DNA-tester og PCR av hepatitt B-viruset er de mest sensitive analysene som oppdager molekylære DNA-spor i leveren som identifiserer tilstedeværelsen av et virus. Kjernen i metoden består i flere kopiering av et DNA-fragment som tilhører sykdomsfremkallingsmiddelet.

Hepatitt B-type PCR er en polymerasekjedereaksjon av et eksternt kjemisk reagens med det biologiske materialet som undersøkes, med sikte på å identifisere virale DNA-molekyler i blodet og deres kvantitative indikatorer per volumenhet. Analysen er tildelt i følgende tilfeller:

• hvis du opplever tegn på hepatitt B hos en pasient;
• under diagnostiske aktiviteter for blandet hepatitt;
• å klargjøre effektiviteten av behandlingen.

For PCR-analyse oppsamles venøs blod. Før studien, bør du avstå fra å spise ca 8 timer.

Et normalt resultat når detekteres DNA i et virus anses å være "ikke detektert". Det betyr at viruset er fraværende i blodet eller innholdet er ubetydelig. Den endelige diagnosen kan kun utarbeides av en spesialist på grunnlag av en omfattende biokjemisk og immunologisk analyse av blodplasma for type B-hepatitt. Legen foreskriver et behandlingsforløp. Selvmedisinering innebærer for mye risiko.

Venøs blodprøvetaking er utført for PCR-analyse.

PCR-metoden gjør det mulig å oppdage patogenens DNA selv med minimal forekomst i den valgte blodprøven. I tillegg tillater analysen å oppdage antigener som allerede er utviklet for viruset. Hvert av antigenene indikerer et bestemt stadium av sykdommen:

• HBsAg - viruset er til stede for øyeblikket.
• Anti-HBcor - patogen er for tiden fraværende, men det var tidligere.
• Anti-HBs - i blodet er det antistoffer mot hepatitt B (som et alternativ - herpes, HIV, klamydia, mycoplasmosis, candidiasis, tuberkulose, kryssbåren encefalitt og mange andre sykdommer).

Patologi og dens tegn

Hepatitt B eller HBV er en viral infeksjon som påvirker leverceller. Det er farlig, ikke bare ved direkte handling på organets parankyme, noe som svekker barrierefunksjonen og generell immunitet. Mer alvorlige konsekvenser er mulige, som levercirrhose og forekomsten av ondartede neoplasmer.

HBV overføres gjennom blodet av en person som er infisert med hepatitt, hans ekskrement, ved kontakt med slimhinner, spesielt under samleie, hudlidelser, gjennom ikke-sterile sprøyter under blodtransfusjon eller under abdominal operasjoner. En nyfødt kan bli smittet av sin syke mor når han berører sprekker i hennes brystvorter.

Følgende symptomer er karakteristiske for hepatitt B:

Uvanlig tretthet

• økende tretthet ved lave belastninger;
• uvanlig tretthet;
• tyngde i høyre hypokondrium;
• redusert appetitt, kvalme;
• yellowness av huden, sclera av øynene;
• lyse avføring;
• mørk urin;
• smerter i leddene.

Inkubasjonsperioden, hvoretter disse symptomene begynner å vises, er fra en til seks måneder. Dette er perioden for akkumulering av virusceller i den hepatiske blodbanen. Når konsentrasjonen når en kritisk masse, bryter viruset gjennom membranene av hepatocytter og fortsetter å formere seg inne i cellene. Som et resultat dør leverceller, utvikler cirrose, som, i fravær av passende terapeutiske tiltak, forårsaker at pasienten er dødelig. En rettidig blodprøve for PCR og Hepatitt B DNA bidrar til å unngå negative.

Indikasjoner for PCR er:

• positiv DNA-test som bekrefter diagnosen hepatitt B;
• akutt og kronisk hepatitt;
• blandet hepatitt;
• kvantitativ bestemmelse av viruset i blodserum;
• utvikling av taktikk for effektiv terapi.

Forberedelse for analyse

Forberedelse for diagnose ved bruk av PCR bestemmes av typen av biomateriale. Så blod og urin donerer bare om morgenen, på tom mage. Også tatt smører og skraper fra det urogenitale området. Den eneste begrensningen for kvinner er menstruasjon. Kjønn er begrenset for begge kjønn på tvelden for forskning.

Resultatene av PCR kan betraktes som pålitelig bare dersom pasienten er riktig forberedt for prosedyren. Denne studien innebærer følgende forhold:

• full av åndelig komfort, fraværet av spenning. For å sikre denne analysen kan bestås selv hjemme. Det er bare nødvendig å ringe lege med riktig utstyr;
• abstaining fra mat, alkohol, røyking, fysisk aktivitet minst 8-12 timer før analysen, ellers vil forskningsdataene bli forvrengt;
• 15-20 minutter fullstendig avslapning før blodoppsamling;
• seponering av medisiner (hvis dette ikke er mulig, bør laboratoriet advare);
• barn under fem år i en halv time før analysen skal gis kokt vann for å drikke i små porsjoner.

Hvordan er studien

PCR-analysen er basert på prinsippene som brukes av molekylærbiologi. De består i bruk av spesielle enzymer som klipper og replikerer deler av DNA og RNA fra det smittsomme stoffet som finnes i blodet. Etter denne operasjonen blir de oppnådde prøvene identifisert av databasen som er tilgjengelig i laboratoriet. På samme tid oppdages typen infeksjon og konsentrasjon i patogenes blod.

For studien brukes en forsterker - en termostat som er i stand til å varme og kjøle rør med biomateriale. Dette er nødvendig for aktivering av replikasjonsprosesser. Nøyaktigheten av analysen avhenger av nøyaktigheten av temperaturparametrene.

Dekoding resultater

Et positivt resultat for pasienten er laboratoriekonklusjonen "ikke oppdaget". Det betyr fravær av hepatitt B-DNA i blod. I numeriske termer er dette ca. 120 IE / ml, eller 200 eksemplarer per samme enhet av blodvolum. Denne verdien er normen. Kravet på biologisk materiale er at det ikke skal være forurenset.

Dekoding av andre analyseresultater tillater følgende diagnoser:

• Hepatitt B DNA-konsentrasjon i blodet er mer enn 200 eksemplarer, men under kritisk nivå. Alvorlig patologi er fraværende.
• Viremia i mild form, opptil 500 eksemplarer per ml. Valget av behandling avhenger av indikatorene for leverbiopsi og graden av forringelse av funksjonene.
• Økt viruskonsentrasjon (mer enn 500 kopier / ml). Den inflammatoriske prosessen i den aktive fasen og krever intensiv antiviral terapi.
• Maksimal viral belastning (over 800 eksemplarer per ml.). Terapeutiske tiltak er utviklet på grunnlag av pasientens tilstand og er rettet mot maksimal forbedring.

For pasienten er et godt resultat konklusjonen "ikke oppdaget"

Bestemmelse av kvantitative indikatorer på DNA-innholdet i hepatitt B under PCR er grunnlaget for valget av terapeutisk kurs. Etter tre eller seks måneder utføres tester igjen for å teste effektiviteten av antiviral terapi.

Polymerase kjede reaksjonsfunksjon

I metoden for PCR benyttes to tilnærminger til bestemmelsen av DNA som tilhører viruset: kvalitativ og kvantitativ.

En kvalitativ tilnærming bekrefter eller nekter tilstedeværelse av hepatitt B. PCR er foreskrevet på forespørsel fra en pasient som mistenker at han er infisert med HBV-infeksjon eller i tilfelle når tidlig diagnose ikke gir entydige resultater på noen annen måte.

Hvis hepatitt B-viruset kan påvises senest to uker etter inntreden i kroppen, er det mest sannsynlig at en positiv prognose for behandling er funnet. I fremtiden vil sykdommen begynne å utvikle seg. Etter ca to måneder kommer hun inn i en kronisk fase. En fullstendig kur i dette tilfellet blir umulig.

En kvantitativ tilnærming til PCR brukes kun når et virus oppdages. Han vurderer:

• spesifikk viral belastning på leveren;
• intensiteten av sykdomsprogresjonen
• motstand mot antivirale legemidler;
• effektiviteten av behandlingen.

Disse indikatorene har direkte praktisk betydning. Spesielt kvantitativ indikator på DNA. Prognosen i den akutte fasen av hepatitt B avhenger av konsentrasjonen av viruset i leverenes blodstrøm. Den lave konsentrasjonen av virusceller utelukker således nesten helt overgangen fra akutt til kronisk hepatitt. Slike pasienter utgjør ikke en fare for andre. Høy viral belastning bidrar til kronisering av den patologiske prosessen og muligheten for hepatittinfeksjon hos personer som er i kontakt med pasienten.

Det er også en sammenheng mellom konsentrasjonen av virale gener i blodet og cirrhotic degenerasjon av leveren, og forekomsten av kreft i dens parenchyma.

PCR-tester hjelper legen å oppdage virusbærere.

Effektiviteten av antiviral terapi bestemmes av graden av reduksjon i konsentrasjonen av hepatitt B-DNA i leversirkulasjonen. Et tilstrekkelig resultat er reduksjonen av viral belastning med 1-2 ganger med intensiv behandling i tre måneder til seks måneder. Lavere priser krever endring i behandlingen.

Prognosen for utviklingen av patologi og utnevnelsen av passende terapi kommer fra:

• kvantitativt volum hepativirus-DNA i blodserum;
• relaterte biokjemiske parametere (for eksempel nivået av leukocytter i blodet og bilirubininnhold der);
• virusinfeksjonsmarkører;
• leverbiopsi resultater.

PCR med generelt formål

Analyser ved hjelp av polymerasekjedereaksjonen hjelper legen:

• oppdage bærere av viruset;
• forutsi utviklingen av hepatitt type B;
• sørg for at sykdommen blir kronisk;
• overvåke virusets aktivitet i alle faser av utvikling;
• identifisere mutante og skjulte stammer av hepatitt B;
• evaluer effektiviteten av behandlingen av viruset når du velger en bestemt taktikk og endrer den ved utilstrekkelig suksess.

Fordeler med metoden

I motsetning til andre tester som brukes til å diagnostisere hepatitt B, har PCR:

PCR-analyse er ekstremt følsom.

1. Eksepsjonell følsomhet. Teknikken tillater forskeren å oppdage sykdomsfremkallende middel, selv om konsentrasjonen av DNA-molekylene i blodet er minimal. Dette gjør at du kan ta forebyggende og helbredende tiltak i et tidlig stadium av sykdommen, når det tilsynelatende ikke er uttrykt av noen symptomer.
2. Bred dekning av muligheter. PCR kan ikke bare detektere årsaksmidlet for viral hepatitt B, men også en rekke andre patologier.
3. Universitet av tilnærminger. Biomaterialet for forskning kan være blod, spytt, slimete celler og hud.
4. Effektivitet. Konklusjonen vil være klar akkurat en dag etter blodprøvetaking (resultatet av selve analysen er oppnådd senest 7 timer).
5. Pålitelighet. Under alle forhold i PCR-metoden, vises aldri falske data.
6. Pris tilgjengelighet studie. Til kost er PCR bare litt høyere enn de vanlige tester som bruker blod som biomateriale.

Den eneste kostnaden for forskning er dens teknologiske kompleksitet. For høy kvalitet implementering av PCR krever et ekstremt rent biomateriale, moderne utstyr og godt trent personale. Det er bedre å søke om diagnostisering ved hjelp av denne metoden til spesialiserte laboratorier.

Viral hepatitt B refererer til sykdommer, en fullstendig kur som bare er mulig i de tidligste stadiene av utviklingen. Identifiser sykdommen i denne fasen hjelper overfølsom diagnose ved PCR. De første symptomene som forårsaker mistanke om leverskader av et virus, bør være en grunn til å konsultere en spesialist. Hvis diagnosen er bekreftet, bør behandlingen påbegynnes umiddelbart. Dette vil forbedre prognosen og øke sannsynligheten for å støtte leveren i en sunn tilstand i mange år.