Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

Hepatitt er en alvorlig sykdom som har mange årsaker. Grunnlaget for utviklingen er direkte eller indirekte skade på leveren. Med tanke på dens betydning for hele organismen, kan man bare gjette hvor vanskelig patologien er. I denne artikkelen vil vi nærmere undersøke funksjonene i kurset og laboratoriediagnosen av hepatitt C.

Årsaken til sykdommen er et virusmiddel som refererer til RNA-holdige patogener. Den har en særegen egenskap - evnen til å mutere, det vil si å forandre strukturen. På grunn av dette unngår infeksjonen immunsystemet og i de fleste tilfeller fører til kronisk betennelse i leveren.

Gitt eksistensen av forskjellige undertyper av viruset, bør valget av medisiner være basert på resultatene av genotyping. Til tross for en lang studie av sykdommen og funksjonene i strukturen av HCV, har det ennå ikke vært mulig å utvikle en spesifikk vaksine for sykdommen.

Vanskelighetene med tidlig diagnose ligger i det asymptomatiske løpet av hepatitt, noe som fører til at en person besøker en lege på cirrose-stadiet. For å oppdage en sykdom i tide, er det nødvendig med vanlige medisinske undersøkelser. Bare ved laboratorietesting av blod er det mulig å oppdage HCV og forhindre infeksjon av de rundt deg. Faktum er at transportøren av infeksjonen i lang tid ikke kan gjette om patologien og fortsette å overføre viruset til friske mennesker.

Måter for overføring

I de fleste tilfeller sprer viruset gjennom blodet, da det inneholder den høyeste konsentrasjonen av patogene stoffer. Dermed overføres infeksjonen:

• med hemodialyse;
• med en infisert nål;
• i ferd med å kjempe, når huden er skadet, og blodkontakt oppstår;
• med blodtransfusjon (blodtransfusjon).

Sannsynligheten for infeksjon under intimitet er ubetydelig, siden det er et lite antall patogener i sæden og vaginal utslipp. Risikoen for infeksjon økes betydelig i strid med integriteten til slimhinnen i kjønnsorganene. Dette observeres med aggressiv og analsex.

Når det gjelder vertikal modus for overføring, utføres den i arbeidsprosessen. I fosterets svangerskapstid kan patogenet ikke trenge gjennom moderkaken til embryoet. Ved naturlig fødsel blir det patogene stoffet overført til barnet ved å traumatisere huden når kontakt med moderens blod blir observert.

Etter patogenes penetrasjon inn i en sunn organisme, begynner syntesen av antistoffer, som er beskyttelse mot infeksjon og tilhører immunstrukturer. De er funnet i den første studien av en person som bruker ELISA.

For å bekrefte diagnosen blir pasienten utsatt for en polymerasekjedereaksjon. Det er en analyse av det genetiske materialet til et patogent middel og bestemmelsen av viral belastning.

Laboratoriediagnose av hepatitt C

Laboratoriediagnose begynner med et enzymimmunoassay. Hovedoppgaven er å oppdage antistoffer produsert mot patogenet. Dens effektivitet er nesten 95%. Takket være denne forskningen er det mulig å identifisere virusbæreren i det prekliniske stadiet og sende det til videre undersøkelse.

En kvalitativ analyse av ELISA indikerer tilstedeværelse eller fravær av immunglobuliner i pasientens blod. Resultatet kan være "positivt" eller "negativt". Etter å ha mottatt det første svaret, blir personen sendt til neste undersøkelse - PCR. Prisen avhenger av kvaliteten på reagensene og laboratoriet. Kostnaden for polymerasekjedereaksjonen kan nå 4000 rubler.

PCR-funksjoner

Ved hjelp av en polymerasekjedereaksjon, tillater selv en liten mengde biologisk materiale oss å estimere virusbelastningen i blodet, det vil si å beregne konsentrasjonen av patogener i en milliliter væske.

Med forekomsten av PCR har diagnosen hepatitt blitt mye lettere. Analysen gjør det mulig å identifisere HCV RNA, for å etablere stadium av infeksjonsprosessen og infektiøsiteten til virusbæreren.

Det finnes flere typer genetisk diagnose:

1. Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C - bekrefter tilstedeværelse eller fravær av HCV i individets blod:
2. kvantitativ, der du kan beregne konsentrasjonen av virus og etablere scenen av sykdommen. Resultatet er gitt i IE / ml eller kopier / ml (avhengig av laboratoriet);
3. genotyping - nødvendig for å bestemme genotypen av HCV. Dette kreves for nøyaktig utvalg av stoffer som vil være mest effektive i dette tilfellet. Analyse indikerer indirekte alvorlighetsgraden av den patologiske prosessen i leveren. I den tredje genotypen av patogenet blir således steatose oftest observert, med utgangspunkt i opphopning av fett i hepatocytter (dets celler). I tillegg påvirker virustype utfallet og varigheten av terapeutisk kurs.

Kvalitativ analyse av PCR for hepatitt C

Først av alt undersøkes biologisk materiale i laboratoriet for tilstedeværelse av HCV RNA. Det er viktig å huske at en kvalitativ analyse av hepatitt C har et visst nivå av følsomhet, og derfor kan det ikke alltid gi riktig svar. I dette tilfellet anbefales det å gjennomføre laboratoriediagnostikk ved hjelp av andre reagenser.

For å oppnå pålitelige resultater, bør testsystemer med følsomhet på minst 50 IE / ml brukes.

Det diagnostiske resultatet kan enten være "positivt" eller "negativt". Hvis patogenet ikke er funnet i blodet, er studien fullført. Hvis det oppdages et patogent middel i prøven, kvantifiseres en viral belastning.

En falsk-negativ respons oppnås når prosessen brytes, for eksempel aktive komponenter som undertrykker byggingen av kopier av patogenet, kommer inn i mediet. Dermed er det ikke mulig å vise et ekte blodbilde, og derfor er en persons infeksjon ikke diagnostisert.

Et falskt positivt resultat kan oppnås hvis røret for innsamling av biologisk materiale, samt miljøet for studien, var forurenset. I tillegg er et slikt analysespons mulig når blandede infeksjoner, når leveren er påvirket av flere virus, for eksempel hepatitt C og D.

Indikasjoner for kvalitativ forskning

Legen kan foreskrive en pasient en kvalitativ studie om identifisering av RNA i hepatitt C-viruset:

• ved mottak av en positiv eller tvilsom enzymimmunoassay-respons;
• for bekreftelse av diagnosen;
• bestemme viral belastning;
• sette scenen av sykdommen;
• diagnose av blandet infeksjon. Hepatitt C infiserer ofte leveren samtidig med "D" -viruset;
• bestemmelse av terapeutisk taktikk med hensyn til årsaksmodellens genotype;
• vurdere dynamikken til endringer under behandling med antivirale medisiner.

Fordelene ved polymerasekjedereaksjonen inkluderer:

1. høy følsomhet av teknikken, noe som gjør det mulig å fastslå faktumet av infeksjon i det prekliniske stadium;
2. identifisering av patogenets genetiske materiale, og ikke dets antistoffer;
3. muligheten for å etablere en subtype av et patogent middel;
4. høy diagnostisk hastighet, siden det ikke kreves såing av materialet på næringsmediet, og det er tilstrekkelig å bruke spesifikke testsystemer. En person får resultatet etter 5 timer;
5. allsidighet. Analysen tillater å identifisere ethvert genetisk materiale (RNA, DNA). Takket være dette kan legen bekrefte hepatitt C og andre typer sykdommen (B);
6. evnen til å oppdage latent infeksjon.

Kvantitativ forskning

I studien av blod ved hjelp av polymerasekjeden kan reaksjonen beregne antall patogener i et fast volum biologisk materiale. Indikatoren er presentert i IE / ml. Gjennom analyse er det mulig å bestemme graden av smitte av pasienten, bestemme stadium av den smittsomme prosessen, og også vurdere effekten av medisinering.

På grunnlag av PCR bestemmer spesialisten hvilke doser medikamenter som kan blokkere reproduksjon av patogener. I tillegg bestemmes varigheten av antiviral behandling og prognose for livet. Det er viktig å huske at testsystemene har høy følsomhet, derfor gjør metoden det mulig å bekrefte infeksjon av en person i det prekliniske stadiet.

genotyping

Gitt patogenes evne til å mutere, er genotypen nødvendig for å bestemme behandlingens taktikk og valg av antivirale legemidler. For eksempel varer behandling av HCV 1 i 48 uker, med en positiv utvikling som bare observeres i 60% av tilfellene. Genotyper 2 og 3 har en mer gunstig prognose. Antivirale legemidler er foreskrevet i 8 måneder, og deres effektivitet når 85%.

Ifølge statistikk er HCV 1, 2 og 3 i de fleste tilfeller registrert i Russland.

Ved deklarering av en laboratorietest kan dette svaret angis - "ikke skrevet". Dette betyr at et virus sirkulerer i pasientens sirkulasjonssystem og ikke kan gjenkjennes av testsystemet. Resultatet av analysen i dette tilfellet indikerer at patogenet ikke er typisk for et gitt geografisk område.

Hvordan får du pålitelige resultater?

For at en kvalitativ studie av PCR for å oppdage RNA av det fremkallende middel av hepatitt C viste de riktige resultatene, er det nødvendig å observere kravene til å forberede laboratoriediagnostikk:

1. blodprøvetaking utføres på tom mage, og det "sultne" gapet bør ikke være kortere enn 8 timer;
2. To dager før studien anbefales det å slutte å drikke alkoholholdige drikker og forlate krydret, fett og røkt mat;
3. Avbryt introduksjonen av legemidler som reduserer blodproppene, for eksempel heparin. Hvis disse legemidlene er foreskrevet av helsehensyn, må du varsle legen. I tillegg bør spesialisten være oppmerksom på inntak av andre legemidler som kan påvirke resultatet av laboratorieforskning;
4. På tærskelen til samlingen av biologisk materiale, bør fysioterapeutiske prosedyrer ikke utføres og bør bli utsatt for alvorlig fysisk anstrengelse.

Resultatene av analysen kan påvirkes ikke bare av den personen som donerer blod, men også av andre faktorer, nemlig:

• dårlig kvalitet blod prøvetaking;
• manglende overholdelse av anbefalinger om transport av biologisk materiale
• Utilstrekkelig opplæring av laboratoriearbeidere;
• manglende overholdelse av forskningsteknikken;
• innføring av antikoagulantia (heparin) på kvelden før blodprøvetaking. Denne gruppen medikamenter reduserer koagulering, og derved reduserer arbeidet med reagenser.

I ulike laboratorier kan diagnostisk respons avvike noe, men disse feilene påvirker ikke det endelige resultatet av studien.

Spesiell oppmerksomhet er lagt til hvilke typer testsystemer som brukes i laboratoriet. Ofte gis fortrinn til reagenser med høy følsomhet. Dette er viktig for pasienter med lav viral belastning fordi det er vanskelig å oppdage.

Hvor ofte utføres en laboratorietest?

Primær polymerasekjedereaksjon utføres hos mennesker som har blitt påvist ved immunoassay for antistoffer mot patogenet av hepatitt. I dette tilfellet er det tildelt å bekrefte faktum av infeksjon av en person og etablere stadium av sykdommen. I tillegg tillater analysen å bestemme subtype av viruset, noe som er spesielt viktig for valg av medisiner.

Neste periode for obligatorisk laboratorietesting er 3 måneder fra starten av antiviral terapi. Diagnostikk gjør det mulig å vurdere effektiviteten av medisiner, justere dosen eller erstatte dem.

I tillegg til grunnleggende tester kan PCR i tillegg utføres ved 4 og 24 uker fra starten av behandlingen. En positiv prognose av sykdommen er bekreftet av en reduksjon i viral belastning etter tre måneders behandling. For eksempel bør den reduseres fra 1 million IE / ml til flere hundre tusen.

Hvis konsentrasjonen av patogene stoffer i blodet forblir på samme nivå eller øker noe, indikerer dette ineffektiviteten av antivirale midler og krever erstatning. Ved bruk av PCR ved slutten av behandlingen, er det mulig å bekrefte pasientens utvinning.

For å korrekt tolke resultatene av laboratoriediagnostikk, er det nødvendig med konsultasjon av en hepatolog eller smittsomme sykdommer. Gitt den høye frekvensen av falske responser i ELISA, brukes analysen utelukkende til primær screening. For en grundigere undersøkelse av den anvendte polymerasekjedereaksjonen.

Pro-analyse av PCR for hepatitt C-virus

Hepatitt C er en alvorlig leversykdom for enhver person. Patologien er forårsaket av flavivirus HCV, i strukturen som RNA molekylet er tilstede, som bærer den generelle genetiske koden til viruset.

Patologi kan være av forskjellige former, alt avhenger direkte av den generelle tilstanden til personen og egenskapene til hver enkelt organisme.

Denne strukturen gjør det mulig å analysere PCR for tilstedeværelse i kroppen av et virus i kategorien hepatitt C.

Det gir deg mulighet til rettidig å identifisere et virus som er farlig for mennesker, gjennomgå et behandlingsforløp og gjenopprette helse, beskytte kroppen mot ødeleggelse av leveren.

HCV-viruset kan manifestere seg, både i akutt farlig form og i kronisk. Hvis en person på et eller annet tidspunkt har oppdaget dette viruset, må det tildeles PCR-analyse.

Hvorfor utføres PCR-analyse?

Basert på resultatene av analysen, vil legen kunne utarbeide et behandlingsregime.

Laboratoriemedisinsk analyse av PCR for hepatitt C er en studie av biologisk materiale tatt for å bestemme flavavirus. Studien står for polymerasekjedereaksjon.

Den viser den totale kvantitative verdien av viral lesjonen, dens kvalitative egenskaper, og det er også mulig å bestemme genotypen av viruset som inneholder RNA.

Det er viktig! Det er på grunnlag av denne analysen at legen bestemmer metoden, type terapi og dens varighet. Også gjennom analyse er det mulig å bestemme den samlede epidemiologiske faktoren, det vil si nivået av risiko for overføring av sykdommen til andre bærere.

Analyse i moderne medisin kalles også RNA analyse. Årsaken er at inneboende for hepatitt C-flavavirus er sammensatt av en partikkel av RNA, hvis størrelse er ca. 30-60 nm. En av de karakteristiske egenskapene til dette viruset er en viss tilbøyelighet til mutasjon.

Hver underart eller genotype tilstede har en rekke motstand. Denne forhold blir grunnlaget for ulike metoder for forskning og behandling av sykdommen, samt en ytterligere prognose med velutført behandling.

Hvordan gjør

Analysen utføres strengt på tom mage, det vil si venøs blod blir gitt før frokost. Testmetoden utføres ved hjelp av sanntids-PCR eller svært følsom av moderne standarddiagnostikk, som utføres i sanntid.

Den nedre grense for deteksjon i dette tilfellet er 15 IE / ml. Analysen utføres strengt ved bruk av lukkede automatiserte systemer. Hepatitt C kan bestemmes ved bruk av tester som COBAS AMPLICOR med et generelt følsomhetsnivå på 50-100 IE / ml.

Det er viktig! Alle typer lignende moderne laboratorieundersøkelser utføres på grunnlag av å ta hensyn til en bestemt sensitivitetsgrense.

Vi snakker om evnen til reagenset som brukes til å oppdage minimumsnivået av reagensets evne til å bestemme viruset i det biologiske materialet som studeres. Hvis det ikke er noen sykdom i kroppen, vil resultatet av studien se ut som "ikke funnet".

Bildet viser en PCR analyse krets:

Typer av PCR-analyse og dens resultater

Hvis du har de fleste mindre plager og smerter i informasjonskapsler, bør du umiddelbart konsultere en lege som skal gjennomføre en grundig undersøkelse. PCR-analyse for hepatitt C er basert på tre hovedpunkter:

1. Kvantitativ analyse.
2. Kvalitativ analyse.
3. Genotyping.

Utførte tester gir en mulighet til å bestemme og identifisere den eksakte naturen av viremia og forskjellige genetiske plan symptomer på forekomsten av patogenet. I direkte forhold til følsomheten, fra det diagnostiske systemet som utføres, kan medisinsk forskning utføres en gang, samt en viss bekreftelse.

Dette bør gjøres for å klargjøre tidligere oppnådde resultater, og brukes i dette tilfellet av et mer sensitivt reagens.

PCR av høy kvalitet

En kvalitativ analyse for PCR er et annet navn for en studie som polymerasekjedereaksjon. Med testens standardfølsomhet, som gjør det mulig å bestemme tilstedeværelsen av en viral mikrobe, vil indikatorene ligge i området 10-500 IE / ml.

Med en negativ analyse av sykdommen vil analysen vise at det totale konsentrasjonsnivået i pasientens blod vil være en størrelsesorden lavere enn den generelle sensitivitetstrømen for diagnosesystemet.

Hvis en "ikke oppdaget" respons ble oppnådd under kvalitets-PCR, for etterfølgende behandling, må du kjenne den totale følsomhetsgrensen for reagenset. Når det gjelder den positive responsen, under PCR-analysen, kan den oppnås allerede den fjerde dagen etter infeksjonen. Standardproteinfraksjoner til etablerte flavaviruser kan forekomme mye senere.

Den generelle planen for PCR-analyser kan avbildes som følger:

Kvantitativ PCR

Kvantitativ PCR er en spesiell indikator for den produserte virale belastningen, og reflekterer det totale nivået av virus RNA-konsentrasjon i menneskekroppen. Denne indikatoren viser mengden av virale RNA-enzymer som er til stede per kubikkcentimeter tatt fra blodvenen.

Resultatene av denne studien i systemet for medisinsk forskning er betegnet i enheter på en milliliter. På sertifikater utstedt i hendene, kan denne indikatoren se ut som 1,7 millioner eller 1,700,000 IE / ml.

Kvantitativ PCR-analyse er tildelt de pasientene før de utfører antiviral terapi. Den andre gangen avholdes den 12. behandlingsuke, som gjør det mulig å korrekt evaluere resultatene av terapi med hepatitt C. Med andre ord gjør analysen det mulig å bestemme slike viktige parametere som:

1. Infeksjonsnivået, det vil si graden av risiko for mikrobiell overføring fra en infisert person til en sunn person, er bestemt. Jo høyere konsentrasjonen av flavavirus-RNA, jo høyere er sannsynligheten for infeksjon hos en annen person, noe som er viktig i seksuelle relasjoner.
2. Det totale effektivitetsnivået og den valgte behandlingsmetoden.
3. Dette er en ideell mulighet til å bestemme varigheten og prognosen for antiviral terapi. Som regel, jo høyere belastning, jo lengre vil behandlingen vare.

Det er verdt å vite at kvantitativ PCR avhenger av den spesifikke typen laboratorietest og følsomhetsgrensen. Den laveste grensen for den etablerte standarden er indikatoren når ikke 600.000 IE / ml.

Gjennomsnittet ligger i området 600.000 til 700.000 IE / ml. Hvis resultatene ble oppnådd over 800.000 IE / ml, bestemmer legen umiddelbart et høyt konsentrasjonsnivå for et stoff som RNA med et virus tilstede i sammensetningen.

Det er viktig! Det direkte forholdet mellom nivået av HCV RNA og alvorlighetsgraden av sykdommen antyder at dette viruset er tilstede i den generelle blodsammensetningen, og noterer også kompleksiteten av patologien. Pasienten kan ha en tilstrekkelig høy viral belastning. I tillegg indikerer dette forholdet at det er en ganske alvorlig skade på cellene.

genotyping

På grunn av den relativt høye mutasjonsaktiviteten til HCV i naturen, er det i løpet av testen som er utført, mulig å bestemme hvordan viruset er tilstede i en sykes blod. I moderne medisin er 11 genotyper av et virus som hepatitt C kjent. Det inneholder et ganske stort antall forskjellige underarter eller subtyper.

Typer 1,2 og 3 er kjent og vanlige i Russland. Generelt er genotyping et svært viktig element i analysen som utføres. Med den forstår legen nivået av resistens eller motstand av patologien til de valgte stoffene.

Nesten alltid, på grunnlag av denne analysen, er fremtidig behandling bygget. Dette er viktig fordi det er behandlingsregler som:

Kvalitativ analyse for hepatitt C

8. mars, 2017, 12:29 Ekspertartikler: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547

En kvalitativ analyse av polymerasekjedereaksjonen - PCR for hepatitt C bestemmer tilstedeværelsen eller fraværet av HCV i kroppen. I laboratorieforhold undersøkes strukturen av RNA, som vil inkludere viruset. Ved detektering av viruset C, er det nødvendig å gjennomgå et behandlingsforløp, siden den forsømte tilstanden til leveren vil medføre alvorlige konsekvenser. PCR av høy kvalitet utføres etter utvinning for å bekrefte fraværet av antistoffer. Utnevnt og for rutinemessig inspeksjon. Med lav konsentrasjon av det forårsakerende middelet i blodet, kan PCR (kvalitativ) ikke oppdage noe, fordi diagnostikksystemet har sine egne følsomhetsgrenser. I tilfelle av den første fasen av sykdommen eller den milde formen, utføres PCR ved ultradiagnostikk på ekstremt følsomt utstyr.

Hva er RNA-virus?

Begrepet RNA i hepatitt C-viruset (eller hepatitt C-virus-RNA) er selve leversykdommen. Virus C binder seg til den sunne cellen i kroppen ved å trenge inn i kroppen. Over tid, spredt over hele kroppen, er det bare nødvendig å komme inn i blodet. Som et resultat trengs patogenet i leveren, smelter med sine celler og virker hardt. Leverceller (hepatocytter) virker under påvirkning, undergår endringer, og fra dette dør de. Jo lengre viruset C er i leveren, jo større antall celler dør. Over tid utvikler farlige sykdommer, som fører til ondartet degenerasjon og død.

Infeksjon av leveren med denne typen virus kan ikke manifestere seg eksternt. I mange år eller flere tiår føler en smittet seg helt sunn, og bare en tilfeldig undersøkelse avslører ofte patologi. Når du donerer blod for hepatitt, undersøkes en del av RNA (ribonukleinsyre) kjeden, som er en del av det humane genet (DNA). Resultatene av laboratorietester bør ikke brukes til selvbehandling, fordi dette bare er en indikator. Det nøyaktige bildet og ytterligere diagnose er bedre bestemt av legen.

Når ferdig: indikasjoner på forskning

I bekreftelse på HCV utføres PCR-analyse (polymerasekjedereaksjon). PCR-studier bidrar til å finne årsaksmidlet i RNA-strukturen og foreskrive en effektiv terapi. Utnevnt i følgende tilfeller:

• påvisning av tegn på betennelse i leveren;
• screening studier for forebygging;
• undersøkelse av personer i kontakt
• diagnose av hepatitt av blandet opprinnelse (bestemmelse av hovedpatogenet);
• bestemme nivået på reproduksjonsaktivitet av viruset i kronisk form;
• levercirrhose;
• for å bestemme effektiviteten av den foreskrevne behandlingen.

Forskning PCR foreskriver en lege for å bestemme effektiviteten av behandlingsforløpet av hepatitt.

Det er en kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR. Kvantitativ PCR viser prosentandelen av RNA med virusbærere i blodet, og kvalitativ indikerer viral tilstedeværelse eller fravær. En positiv indikator for kvalitet (tilstedeværelse av hepatitt C RNA) trenger også kvantitativ forskning. Et høyt konsentrasjonsnivå for det fremkallende middel til hepatitt C er forbundet med risikoen for overføring, det vil si infeksjon av andre. Lave tall er bedre behandles. Mengden av RNA-virus i blodet er ikke relatert til intensiteten av sykdommen. PCR-analyse gjøres også ved interferonbehandling for å foreskrive varighet og kompleksitet i behandlingsforløpet.

Egenskaper av høy kvalitet PCR analyse for hepatitt C

En kvalitativ analyse er tildelt med en polymerasekjedereaksjonsindikator for alle pasienter som har antistoffer mot hepatitt C i blodet. De som har vært syk og gjenopprettet, må ta testen igjen. Det anbefales å ta en analyse for hepatitt B, da i en positiv konklusjon og for hepatitt D. Også kvalitativt analysert reaksjon skal utføres i forbindelse med andre blodprøver. Analyser vil vise et komplett bilde av viral spredning.

Fra testresultatene vil bare en positiv test for hepatitt C være synlig eller negativ, det vil si tilstedeværelse eller fravær av et virus. Hvis utgangen er "detektert", er viruset og fortsetter å være aktivt. Betegnelsen "ikke oppdaget" indikerer fraværet av et virus eller dets lille mengde. Med denne indikatoren bør man huske på at diagnostiske systemers analytiske følsomhet er forskjellig og at RNA hepatitt C fortsatt kan være i blodet, men ikke manifestert i analysen.

En spesielt sensitiv PCR-metode avslører ultra hepatitt C selv i små mengder. En fluorescens hybridiseringsstudie brukes, som er mange ganger høyere enn standard PCR-systemer. Metoden brukes i flere tilfeller:

• mistenkte skjulte former for hepatitt C;
• PCR-diagnostikk bekreftet ikke patogenet, men det er antistoffer;
• i tilfelle gjenoppretting
• å oppdage tidlig infeksjon.

Tilbake til innholdsfortegnelsen

Dekoding analyse

PCR-dekoding av HCV påvirker den endelige avgjørelsen når man foretar en diagnose, særlig med ultrametod-metoden. Den største ulempen ved denne studien er streng overholdelse av sterile forhold for prøven og materialene. En liten avvik viser noen ganger unøyaktige analytiske konklusjoner, kompliserer diagnose og etterfølgende behandling. Analyse av PCR for bestemmelse av hepatitt-RNA viser ikke alltid trygt et bilde av sykdommen, noen ganger er unøyaktigheter tillatt, og i begge retninger.

Diagnostisering av hepatittvirus, det anbefales å bruke en omfattende undersøkelse.

Norm for indikatorer

Fraværet av JgM antistoffer mot viral hepatitt C i resultatene av studien regnes som normen i analysen av polymerasekjedereaksjonen. Samtidig viser funnene av serologisk analyse tilstedeværelsen av antistoffer mot virus C, og dette er også innenfor det normale området. En kvalitativ definisjon viser ikke intensiteten av sykdommen, det avslører bare årsaksmedlet til hepatitt C i RNA. Denne analysen gjentas etter behandling for å bekrefte den faktiske utvinningen.

avvik

Hvis JgM antistoffer mot HCV RNA er tilstede, indikerer dette en utviklingsinfeksjon. Sykdommen pågår samtidig akutt eller kronisk, manifestert i forskjellige stadier. Hvis en nedgang i antall antistoffer registreres, vil analysen indikere at resultatene av behandlingen ble oppnådd under utvinning. Det er svært sjeldne tilfeller av falske positive funn i diagnostikk. De finnes hos kvinner under graviditet og hos personer med andre smittsomme sykdommer.

PCR-analyse for hepatitt C

For diagnosen "kronisk viral hepatitt C (CVHS)" krever en omfattende undersøkelse av personen, som inkluderer kliniske, laboratorie- og instrumentstudier. Viktig fra diagnosenes synspunkt for riktig diagnose er PCR-metoden - polymerasekjedereaksjon.

Hva viser denne analysen og hvorfor er det nødvendig?

Denne laboratoriemetoden oppdager RNA av hepatitt C-viruset i humant blod. Sammen med den enzymbundne immunosorbentanalysen (ELISA) for antistoffer mot viruset, brukes PCR til å diagnostisere CVHC og dets patogengenotype. Denne undersøkelsen er en av de nyeste metodene for laboratoriediagnostikk. Dens pålitelighet ved CVHS overstiger 97%, noe som anses som en veldig god indikator for forskning.

Det er tre PCR blodprøver for CVHS: kvalitativ, kvantitativ og virusgenotyping. Den første studien (kvalitativ analyse) av viruset oppdager det i blodet, og brukes derfor kun til diagnose.

Den andre (kvantitative) studien bestemmer graden av viral belastning på kroppen, derfor brukes til å overvåke effektiviteten av behandlingen.

Den tredje PCR (genotyping) klargjør diagnosen, og etablerer genotypen av viruset, noe som er svært viktig for utnevnelsen av riktig antiviral behandling.

Essensen av polymerasekjedereaksjonsteknikken er bruken av enzymer som multipliserer det genetiske materialet til patogenet i biomaterialet. Under prosessen med slik replikasjon oppvarmes røret med blod flere ganger og avkjøles til temperaturen som kreves for å akselerere den enzymatiske reaksjonen. Som et resultat av disse manipulasjonene øker mengden av det virale genomet mange ganger, slik at det kan detekteres selv med en minimal mengde.

PCR-diagnostikk har mange fordeler i forhold til andre laboratorietester:

• høy følsomhet - 97-98%;
• garantert analytisk spesifisitet (avslører nøyaktig det patogenet du vil finne, og ikke dets relaterte belastning);
• Hastighetshastighet (det tar ikke mer enn 2 dager å få en konklusjon).

Tre typer PCR-analyser

Høykvalitets PCR-analyse er tildelt alle pasienter der ELISA-analyse oppdaget antistoffer mot HVGS-viruset. Etter å ha utført PCR av høy kvalitet, kan to responsalternativer oppnås: "RNA er detektert" eller "RNA blir ikke oppdaget." For å oppdage minimal mengde virus i blodet, er det nødvendig med testsystemer med følsomhet på minst 50 IE / ml. Hvis konsentrasjonen av viruset i pasientens blod er mindre enn det diagnostiske stoffet kan bestemme, kan resultatet av studien være falskt negativt. For å unngå en slik diagnostisk feil, bør laboratorier som utfører PCR-diagnostikk, forsynes med svært sensitive testsystemer. I laboratoriet "Invitro", for eksempel, brukes tester med følsomhet på 15 IE / ml. Laboratoriearbeidere er forpliktet til å gi informasjon om sensitiviteten til testene til pasienter og leger ved første forespørsel.

Kvantitativ analyse av PCR bestemmer graden av viremia, det vil si konsentrasjonen av patogenet i blodet, viral belastning. Resultatet av denne studien, i motsetning til høyverdig PCR, uttrykkes i antall, for eksempel 2 x 10 * 6 IE / ml, som betyr 2 millioner internasjonale enheter i 1 ml blod. Noen laboratorier bruker en annen indikator - antall kopier / ml. Disse to indikatorene er enkle å konvertere: 1 internasjonal enhet er 4 eksemplarer av RNA. Dermed vil 2 x 10 * 6 IE / ml bety at 8 x 10 * 6 kopier av virus RNA i 1 ml, dvs. 8 millioner eksemplarer i 1 ml blod.

Genotyping er definisjonen av et av seks genotyper av et virus. Det kliniske bildet, utviklingsgraden av leverkomplikasjoner og prognosen for pasientens fremtidige liv, er avhengig av årsaksmodellens genotype. Genotypen av viruset er svært viktig allerede i diagnosetrinnet, siden kombinasjonen av legemidler og varigheten av terapeutisk kurs som skal tildeles pasienten, avhenger av riktig bestemmelse.

Men selv denne tilsynelatende "perfekte" laboratorieforskningen har sine ulemper:

• studien replikerer det genetiske materialet til alle patogener, selv ikke-levende, noe som kan forvride resultatet. Derfor, for å overvåke effektiviteten ved hjelp av PCR, utføres reanalyse ikke tidligere enn 2 måneder etter den forrige, slik at de døde virusene kan "forlate" pasientens organisme;
• En del av virusgenomet, som bestemmes ved hjelp av testsystemer, kan teoretisk være tilstede i andre virus eller mikroorganismer, så det er en mulighet for en falsk positiv respons;
• virus mutere raskt. Noen ganger er hastigheten og omfanget av virusmutasjon så høy at testsystemet slutter å fange sitt genom. Som et resultat er et falskt negativt resultat mulig.

For å utjevne disse manglene, utfører produsenter av laboratorietestsystemer for PCR-diagnostikk hele tiden sine tester, inkludert kryssreaksjoner og følsomhet overfor en bestemt genotype av viruset.

Hvordan ta en PCR-test for hepatitt C?

For at konklusjonen av en PCR-undersøkelse skal være pålitelig, er det nødvendig å nøye følge regler for utarbeidelse av sin oppførsel:

• studien utføres på tom mage (glukose, fett, mineraler som kommer inn i blodet fra mat, kan påvirke hastigheten og kvaliteten på enzymreaksjonen);
• gapet mellom det siste måltidet og blodprøvetaking for analyse bør være minst 8 timer;
• på tvers av studien er det forbudt å ta alkohol og konsumere fettstoffer, hvor elimineringsperioden er langvarig;
• en dag før du går til laboratoriet, bør unngå sterkt fysisk og følelsesmessig stress;
• inntil blodprøvetaking ikke anbefales å røyke.

For å unngå utseendet av falske konklusjoner, må den påståtte pasienten komme til laboratoriet litt tidligere enn blodet vil bli tatt. Det tar 15-20 minutter for en person å fange hans pust, roe seg ned. Adrenalin, som er tilstede i blodet etter en rask tur, kan påvirke resultatet av undersøkelsen.

Hvis pasienten som er referert til analyse, tar medisiner, bør han varsle legen om dette. Det er mulig at noen av dem må nektes i noen tid (hvis mulig).

Resultatet av analysen av PCR for hepatitt C

Dekoding av resultatene som er involvert i laboratorielegen på laboratoriet som gjennomførte analysen. Dekoding er bestemmelsen av avviket av resultatet oppnådd fra normen. Indikatorhastigheten er etablert direkte av produsenten av testsystemet, som brukes av laboratoriet for diagnostikk. Det er derfor ikke overraskende at i noen laboratorier er virusbelastningen bestemt i IE / ml, og i andre i eksemplarer / ml.

Etter å ha fått konklusjonen, er det nødvendig å kunne tolke det riktig. Behandling av resultatene av studien skal utføres av pasientens pasient med hepatitt C. Bare etter en objektiv, instrumentell og laboratorieundersøkelse av pasienten, kan legen oppnå tilstrekkelig mengde data for korrekt tolkning av de oppnådde PCR-resultatene.

Evaluering av kvalitativ analyse, som regel, forårsaker ikke vanskeligheter, selv hos pasienter. Resultatet kan bare være ett: "oppdaget" eller "ikke oppdaget". I dette tilfellet er den andre av normen.

Indikatorer for kvantitativ analyse er vanskeligere å tolke. Det viser graden av virusbelastning på pasienten. Selv blant hepatologer er det ingen konsensus om hvordan man skal behandle den oppdagede viremien. De fleste leger er tilbøyelige til å tro at en høy belastning på mer enn 8 × 10 * 5 IE / ml bør vurderes. En belastning på mer enn 1 × 10 * 7 IE / ml regnes som svært høy, mens en lav belastning er mindre enn 4 × 10 * 5 IE / ml.

Graden av virusbelastning indikerer virulens (aggressivitet) av viruset: jo større mengde i blodet, desto raskere komplikasjoner av leveren kan utvikles. En høy konsentrasjon av viruset i blodet av en gravid kvinne øker sannsynligheten for dens penetrasjon gjennom hemato-placental barrieren mot fosteret. Viremia påvirker også effektiviteten av behandlingen: med lavt antall, er effektiviteten av behandlingen høyere enn hos de høye.

For å være trygg på nøyaktigheten av analysen av PCR for hepatitt C, er det nødvendig å gi fortrinn til de laboratorier som er godt bevist. Prispolitikken i dette tilfellet skal ikke spille en hovedrolle.

Bruk av PCR-diagnostikk

Polymeraskjedereaksjon (PCR) i molekylærbiologi er en eksperimentell metode for å oppdage virus. Det lar deg øke konsentrasjonen av bestemte nukleinsyrefragmenter (DNA) i prøver av biologisk materiale, noe som gjør det mulig å bestemme (gjenkjenne) og telle dem.

Analysen utføres som følger. Genetisk materiale (en blodprøve), som potensielt kan inkludere det ønskede genet, blir introdusert i røret. Det er også plassert primere - kjemisk syntetiserte segmenter av en liten lengde av det ønskede gen.

DNA- eller RNA-polymerase er også tilsatt til karet, det er i stand til å lineere opp en nukleinsyrekjede som er helt identisk med originalen. Den resulterende sammensetningen injiseres og et sett med fire fri nukleotider - et spesielt byggemateriale for RNA eller DNA, hvorav den ene inneholder radioaktive fosforpartikler.

Den resulterende blanding oppvarmes til 95-96 ° C, og derfor er to DNA-spiraler, som normalt er sammenflettet, vevd. Deretter avkjøles legemidlet, da primere selv fester seg til ønsket region av virusgenomet, og forhindrer RNA (eller DNA) fra å omforme dobbelthelixen.

Under kjøleprosessen søker polymerasen etter en fri nukleotidkjede. For funksjonen av dette enzymet er det nødvendig en enkelt kjede av nukleotider. Siden polymerase glir langs DNA-kjeden (som en ring på et tau), er det ikke i stand til å arbeide på en dobbelt helix.

Etter dette utføres en gjentatt oppvarmingssyklus på grunn av hvilke kjeder av nukleotider separeres. Ved hver av disse syklusene av PCR øker mengden i prøven av det ønskede hepatittgenet eksponentielt, og resten av det genetiske materialet blir produsert (vokser) lineært.

Etter rensing av løsningen fra nukleotidrester og separasjon ved elektroforese av DNA-kjeder av molekylvektsparameteren, kan man lett bestemme om det er et ønsket gen i prøven under studiet eller ikke.

Fordeler med PCR

Laboratorietesting ved hjelp av PCR tillater enda mer informasjon enn tilstedeværelsen av virus-RNA. Ved å bestemme parameteren for nivået av radioaktiv stråling, er det mulig å identifisere hvor mye genetisk materiale som opprinnelig var inneholdt i prøven under studien. I tilfelle av hepatitt, bestem indikatoren for nivået av viral belastning.

En annen fordel ved denne metoden er den meget høye følsomhetsgrad av CR-reaksjonen. Det er mye høyere enn de klassiske metodene for å oppdage virus. Ideelt sett, for å identifisere ønsket gen, for PCR, er bare ett virus i prøven tilstrekkelig.

I tillegg er PCR helt spesifikk. Dens primere er utformet på en slik måte at de stemmer fullt overens med de unike områdene av de ønskede gener som ingen annen sekvens har. Som fingeravtrykk er unike, har hvert gen unike sekvenser av nukleotider.

Kvalitativ analyse av PCR

Kvalitativ analyse viser bare tilstedeværelsen av viruset i blodet. Denne testen bør utføres for alle pasienter i hvilke antistoffer mot hepatitt C ble funnet i blodet. Det kan resultere i bare en av to verdier: "detektert" eller "ikke oppdaget". I en sunn person bør normen (referanseverdi) "ikke oppdages".

Det er en spesiell tolkning av slike resultater av den kvalitative forskningen:

• Resultatet er "oppdaget". Dette betyr at et fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset ble funnet i den analyserte prøven av biologisk materiale tatt. Det er følgelig et faktum at pasienten er infisert med hepatitt C-viruset. og på dette tidspunktet smitter det nye leverceller i kroppen.
• Resultatet er "ikke oppdaget". En slik vurdering indikerer at i det analyserte prøven av det oppnådde biologiske materialet i dette laboratoriet ble det ikke funnet noe fragment av RNA som er spesifikt for hepatitt C-viruset.

I den akutte fasen av hepatitt C-virus-RNA kan slike kvalitative studier ved PCR-metoden påvises allerede etter 1-2 uker umiddelbart etter kroppsinfeksjon, det vil si lenge før utseendet av antistoffer mot hepatitt selv.

Upålitelige testresultater av denne studien kan fås ved å:

• forurenset biomateriale;
• tilstedeværelsen av heparin i pasientens blod;
• Tilstedeværelsen i prøven av kjemiske eller proteinstoffer (inhibitorer) som påvirker de ulike komponentene i PCR.

For å utføre en kvalitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten for studien. Materialet som brukes er venøst ​​blod.

Evaluering av resultater

HPR-test av høy kvalitet har en viss grad av følsomhet, og avhengig av nøyaktigheten av forskningen og nivået på utstyret i laboratoriet kan variere fra 10 til 500 IE / ml.

Dette betyr at hvis viruset i blodprøven er tilstede i en meget lav konsentrasjon (mindre enn terskelverdien av følsomheten til dette laboratoriet), kan resultatet for den syke pasienten ikke "detekteres". På grunn av dette, når man utfører en kvalitativ analyse av PCR med lavt nivå av viremia (lav viruskonsentrasjon), for eksempel for pasienter som gjennomgår antiviral terapi, er det svært viktig å kjenne følsomhetsgrensen til dette diagnostiske systemet.

Varianter av diagnostiske systemer

For å kontrollere virologisk respons anbefales det å bruke diagnostiske systemer med en følsomhetsgrense på minst 50 IE / ml når det utføres antiviral behandling. Disse kriteriene er oppfylt, for eksempel med Cobas Ampicolor HCV-test analysatorer (nøyaktig til 50 IE / ml), samt RealBest HCV RNA (med følsomhet på 15 IE / ml).

I henhold til WHO-anbefalinger, for å etablere en endelig diagnose av hepatitt C, er det nødvendig å basere seg bare på tre ganger deteksjon av C-virus-RNA i pasientens serumprøver, uten andre varianter av hepatittmarkører.

I tillegg til PCR-metoder, brukes en TMA-analyse (transkripsjonal amplifikasjonsmetode) til å detektere HCV RNA hos pasienter. Den har den beste følsomhetsgrensen (5-10 IE / ml), men i vårt land er en slik testmetode ennå ikke så vanlig.

Utvalget av detekterte virusendringer

En slik kvalitativ bestemmelse i serum av tilstedeværelsen av hepatitt C-virus-RNA gjør det mulig å bestemme flere genotyper av dette viruset. For tiden vet vitenskapen mer enn seks genotyper av dette viruset, så vel som om 10 subtyper av denne sykdommen.

I vårt land er vanlige virus 1, 2, 3 genotyper. Laboratorier kan oppdage følgende genotyper: 1a og 1b, 2a, 2b og 2c, samt 3, 4, 5a og 6, uavhengig av undertyper. For alle virusmodifikasjoner er deteksjonsspecifikiteten 100%.

PCR kvantitativ analyse

Ved bruk av en kvantitativ PCR-test, bestemmes nivået av konsentrasjon av hepatittviruset i blodprøver (virusbelastning). Denne testen for viremia (viruskonsentrasjon) lar deg bestemme antall enheter av et bestemt genetisk materiale (selve viral RNA), som detekteres i en viss mengde. I dette tilfellet bestemme konsentrasjonen i 1 ml, som tilsvarer 1 cu. cm.

Kvantitative analyseparametere er uttrykt i figurer, for dette formål brukes internasjonale enheter (IE) per milliliter (ml), referert til som IE / ml, som måleenheter. Nå, i enkelte laboratorier, kan mengden av virus bestemmes i andre enheter: Antall kopier per ml er angitt som kopier / ml.

• Datoer. For hepatitt C utføres en slik kvantitativ analyse av PCR umiddelbart før starten av behandlingen. Deretter 1., 4., 12. og 24. uke. Evaluering på 12. uke er indikativ, det gjør det mulig å bestemme effektiviteten av terapien.
• Forberedelse for analyse. For å utføre en kvantitativ analyse av PCR, er det ikke nødvendig med spesiell forberedelse av pasienten til studien. En halv time før prøvetaking bør ikke røyke. Venøst ​​blod brukes som laboratoriemateriale.

Evaluering av resultater

For ulike laboratorietestsystemer er det forskjellige konverteringskvoter for denne indikatoren i IE / ml. I gjennomsnitt tar de konverteringsparameteren, hvor 4 kopier / ml = 1 IE / ml. Det vil si at hvis laboratoriet gir resultatet av PCR-analyse 2,4 * 10 6 kopier / ml, da skal denne parameteren deles inn i 4 og vi får 6 * 10 5 IE / ml.

En belastning på 800.000 IE / ml regnes som høy, noe som tilsvarer omtrent 3.000.000 eksemplarer / ml. Lav viremia, ifølge noen forfattere, tilsvarer parametrene for kvantitativ PCR under 400 000 IE / ml.

Som resultat av den kvantitative testen kan de endelige resultatene ikke leveres i form av en digital verdi, men: "under måleområdet" eller "ikke oppdaget".

• Vurdering: "under måleområdet." Dette indikerer at den kvantitative testen ikke klarte å oppdage hepatitt C viral RNA, men selve viruset er tilstede i kroppen i svært lave konsentrasjoner. Dette fremgår av tilleggstestetesten, som bekrefter faktumet av tilstedeværelsen av viruset.
• Vurdering: ikke oppdaget. Dette resultatet indikerer at den kvantitative testen ikke er funnet i prøve RNA-viruset.

Parameteren for viral belastning bestemmer først og fremst graden av smittsomhet av sykdommen, nivået av "infeksjon" av pasienten. Jo høyere pasientens viruskonsentrasjon, desto større er sannsynligheten for at den overføres til andre mennesker. For eksempel, i samleie med en syke person, eller vertikalt. Denne kvantitative indikatoren bidrar også til å bestemme effekten av behandlingen av pasienten.

Å gjennomføre en kvantitativ analyse av KKP er viktig for antiviral terapi, vurderer suksess og planlegger varighet på kurset. Således, med en rask respons fra kroppen til behandling og en lav grad av viremi, kan varigheten av behandlingen reduseres.

Hvis den kvantitative PCR-parameteren reduseres sakte, bør antiviral terapi forlenges eller endres. Hvis nivået av viral belastning er lav, er dette en gunstig faktor i terapi, hvis opphøyet, så er metoden som er ineffektiv, og stoffene eller metoder for bruk skal endres.

Kvalitativ og kvantitativ analyse av PCR for hepatitt C: negativ, positiv, transkripsjon

Hepatitt C er en viral leversykdom forårsaket av flavivirus HCV (fra engelsk hepatitt C-virus), hvis struktur inneholder et ribonukleinsyremolekyl (RNA). RNA bærer virusets genetiske kode. Dens tilstedeværelse tillater analyse av PCR for hepatitt C.

Faren for HCV for en person ligger i det faktum at det såkalte serologiske vinduet (tiden mellom infeksjon og utseendet av en reaksjon fra immunsystemet) kan være ganske lang - fra flere uker til seks måneder.

Det registrerer ikke infeksjon og starter behandling i tide.

Avhengig av organismens individuelle egenskaper kan bæreren av HCV manifestere seg i en akutt form, så vel som oppstå som en kronisk sykdom som vil kreve en lang og dyr behandling. Ved påvisning av antistoffer mot HCV utføres en rekke laboratorietester, inkludert PCR for hepatitt C. Denne testen er utført for alle personer i hvis blodantistoffer mot HCV ble funnet.

Hva er PCR-analyse?

Laboratorieanalyse av PCR for hepatitt C - En studie av biologisk materiale for å identifisere tilstedeværelsen av flavavirus.

Polymerase kjedereaksjon (som forkortelsen står for) viser den kvantitative verdien av kroppens virale skade, dens kvalitative egenskaper, samt genotypen av viruset som inneholder RNA.

På grunnlag av dem, samt på grunnlag av ytterligere analyser, bestemmes metoden og varigheten av behandlingen, samt den epidemiologiske faktoren (graden av risiko for overføring til en annen bærer).

Hva er Hepatitt C RNA-analyse?

Hepatitt C PCR kalles også RNA-analyse (HCV RNA), fordi Flavaviruset inneholder en RNA-partikkel med en virjonsstørrelse på 30-60 nm. En av egenskapene til denne mikroorganismen er en høy tilbøyelighet til mutasjoner.

Hver av virusens underarter (genotyper) har en annen motstand, som forårsaker forskjellige behandlingsmetoder og arten av den videre prognosen for pasienten.

Biologisk materiale (venøst ​​blod) er gitt på tom mage og er som regel undersøkt med realtids PCR-metoden (svært følsom sanntidsdiagnostikk med en lavere deteksjonsgrense på 15 IE / ml ved hjelp av lukkede automatiserte systemer).

Det er andre tester, for eksempel COBAS AMPLICOR med en følsomhet på 50-100 IE / ml. For enhver laboratorietest er terskelen for følsomhet viktig, dvs. Reagens evne til å oppdage minimal konsentrasjon av virus i biologisk materiale.

Typer av analyse for hepatitt C ved PCR

Hepatitt C PCR inneholder tre viktige komponenter:

• kvalitativ analyse;
• kvantitativ analyse;
• genotyping.

Disse testene kan bestemme arten av viremia, så vel som patogenes genetiske egenskaper. Avhengig av diagnostikkens følsomhet utføres studien en gang, og noen ganger utføres en andre test med et mer sensitivt reagens for å bekrefte eller finjustere resultatene.

Høykvalitets PCR hepatitt C

Hepatitt C PCR-analyse kvalitativ er et annet vanlig navn for analysen av polymerasekjedereaksjonen. Standard følsomhet av testen, som gjør det mulig å oppdage tilstedeværelsen av virale lesjoner, ligger i området 10-500 IE / ml.

En negativ PCR-analyse for hepatitt C viser at viruskonsentrasjonen i pasientens blod er under følsomhetstærskelen i diagnosesystemet.

Hvis høyverdig PCR ga svaret "ikke oppdaget", så for etterfølgende behandling er det viktig å finne ut av terskelen for følsomheten til reagenset.

Proteinfraksjoner til flavavirus ser mye senere ut.

Hepatitt C Kvantitativ PCR

Hepatitt C PCR-kvantitativ er en indikator på virusbelastning, som reflekterer nivået av flavavirus-RNA-konsentrasjonen i kroppen. Dette er en indikator som viser hvor mange fragmenter av viralt RNA som finnes i kubikkcentimeter av blod. Resultatene av PCR av hepatitt C RNA i en kvantitativ test i det konvensjonelle systemet er indikert i internasjonale enheter per milliliter (IE / ml) og kan registreres på forskjellige måter, for eksempel 1,7 millioner eller 1,700,000 IE / ml.

Kvantitativ PCR-diagnostikk av hepatitt C er foreskrevet for pasienter før starten av antiviral terapi og i uke 12 i behandling for å evaluere resultatene av den valgte metoden for å håndtere HCV. Viral belastning gjør det mulig å bestemme tre viktige indikatorer for sykdommen:

• smittsomhet, dvs. graden av risiko for virusoverføring fra en bærer til en annen (jo høyere konsentrasjonen av flavavirus-RNA, desto større er sannsynligheten for å infisere en annen person, for eksempel gjennom seksuell kontakt);
• metode og effektivitet av behandlingen;
• Varighet og prognose for antiviral terapi (jo høyere viral belastning, jo lenger behandling varer).

Kvantitativ PCR diagnostikk av hepatitt C er avhengig av type laboratorietest og terskelen for følsomheten. Den nedre grensen til normen anses å være indikator opp til 600.000 IE / ml, gjennomsnittlig verdi ligger i området 600.000-700.000 IE / ml. Resultater på 800.000 IE / ml og over anses høye nivåer av RNA-holdig virus.

genotyping

På grunn av den høye mutasjonelle aktiviteten av HCV i naturen, når det er testet, er det viktig å identifisere hvilken virusgenotype som er i pasientens blod. Totalt har 11 genotyper av hepatitt C-viruset blitt registrert på planeten, som inkluderer mange underarter (undertyper). På territoriet i Russland distribueres 1,2 og 3.

Hepatitt C PCR RNA sammen med genotyping er en svært viktig del av analysen siden gjør det mulig for legen å bestemme motstanden (motstanden) av viruset, velg de aktuelle stoffene og foreskrive et behandlingsforløp.

Genotyping tillater også indirekte bestemmelse av tilstanden til leveren. For eksempel er 3 genotypen av HCV ofte ledsaget av steatose, hvor fett akkumuleres i organets celler.

En blodprøve for PCR for hepatitt C bør produsere en figur som bestemmer genotypen. Laboratorie svar kan si "ikke skrevet" - og dette betyr at et virus er i humant blod som ikke er detektert av testsystemet. Dette kan tyde på at genotypen ikke er typisk for et gitt geografisk område. I dette tilfellet bør du gjenta analysen med en høyere følsomhet for diagnosesystemet.

Dekoding av PCR-analyse for hepatitt C

Testen for hepatitt C PCR kvantitativ dekryptering kan baseres på dataene ovenfor. Når man får resultater fra laboratorietester, skrives vanligvis følgende data:

• "Found" / "not found" (høy kvalitet PCR for hepatitt C);
• antall RNA-holdige fraksjoner, for eksempel 831.680 ME / ml (kvantitativ PCR analyse);
• figuren som bestemmer genotypen for HCV, for eksempel - 1, 2, 3, 4;
• Navnet på testen er oftest sanntid.

Det viktigste ved å dekode PCR-analysen for hepatitt C er det andre elementet som viser virusbelastningen, som bestemmer prognosen, metoden og varigheten av behandlingen.

Hvis PCR-testen for hepatitt C er negativ, og ELISA er positiv - hva betyr dette?

For å dekode laboratorietester, er det viktig å kontakte en hepatolog eller en smittsom spesialist som vil forklare informasjonen som er oppnådd i henhold til type diagnostisk system og dens følsomhetsgrense. I medisinsk praksis er det mange data om blodprøver som kan vildlede en person uten medisinsk utdanning.

For eksempel, hvis testen for hepatitt C-PCR er negativ og ELISA er positiv, kan det bety at det ikke er noen HCV i pasientens blod for øyeblikket, men har tidligere hatt en akutt form for hepatitt C. Det er antistoffer i blodet som er produsert etter invasjonen av viruset tidligere. Men i moderne medisinsk praksis anses ELISA-analyse å være utilstrekkelig pålitelig og gir ofte ujevne resultater, slik at leger bruker det som en primær screening. Ved diagnostisering av en sykdom styres spesialister nettopp ved PCR-test.

Nyttig video

Følgende video forteller på en svært detaljert og interessant måte hva essensen av PCR-metoden er, hvordan analysen utføres:

konklusjon

For analyse av PCR av hepatitt C, er vanligvis venøs blod tatt. Ofte er det et dobbelt inntak av biologisk materiale - for ELISA, og direkte for PCR-test. For riktige testresultater kreves det i samsvar med grunnleggende regler for laboratorieinnsamling av biologisk materiale:

• Blod for analyse er gitt i første halvdel av dagen på tom mage;
• mellom måltid og blodoppsamling bør ta minst 8 timer;
• Alkohol og stekt mat bør også utelukkes før testen utføres.
• i løpet av dagen før du donerer blod, må du unngå høy fysisk anstrengelse.

Blodtestresultater er vanligvis klare neste dag.